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[发明专利]一种封闭式的菌体裂解工艺-CN202010949684.5在审
发明人：张维迪;傅纪星;常依娜;洪谊;张丽 -专利权人：西比曼生物科技（香港）有限公司
申请日： 2020-09-10 - 公布日： 2022-03-11 - 主分类号： C12N1/06 文献下载
摘要：本发明涉及一种封闭式的菌体裂解工艺。具体地，本发明提供一种菌体裂解方法，所述的方法包括步骤：(1)将菌体液置于第一摇床中进行摇动后，将裂解液加入到摇动的菌体液中，经摇动混匀后，静置，得到初菌体裂解液，其中，所述的第一摇床的转速为10‑30rpm，所述的混匀时间为1‑10min；(2)将初菌体裂解液置于第二摇床中进行摇动后，将缓冲液加入到摇动的初菌体裂解液中，经摇动混匀后，静置，得到菌体裂解液；其中，所述的第二摇床的转速为10‑70rpm，所述的混匀时间为1‑10min。本发明所述的菌体裂解方法相对于传统的人力裂解方式或搅拌式裂解方式能够显著提高菌体与裂解液充分混合，从而使质粒从菌体中释放出来，提高质粒的产量，且提高质粒浓度和超螺旋比例。
一种封闭式菌体裂解工艺

[发明专利]缺刻缘绿藻溶血磷脂酸酰基转移酶基因及其应用-CN201810338650.5有效
发明人：周志刚;常依娜;包虹 -专利权人：上海海洋大学
申请日： 2018-04-16 - 公布日： 2019-09-06 - 主分类号： C12N15/54 文献下载
摘要：本发明涉及缺刻缘绿藻溶血磷脂酸酰基转移酶(LPAAT)基因及其应用。本发明克隆了缺刻缘绿藻LPAAT这个被认为是TAG合成的关键酶的基因，并命名为MiLPAAT。进一步构建了MiLPAAT的原核表达载体，经转化大肠杆菌BL21并诱导培养后，纯化获得重组表达的MiLPAAT成熟蛋白，体外酶活性检测和酶催化反应产物的薄层色谱结果显示，重组的MiLPAAT成熟蛋白可以将LPA合成为PA，表明MiLPAAT编码的蛋白具有LPAAT的功能，能将LPA催化合成为PA，后者沿着肯尼迪途径，在藻细胞中可进一步被合成为TAG。本发明为利用MiLPAAT基因在粮油作物中过表达以增加三酰甘油的产量奠定了基础。
缺刻缘绿藻溶血磷脂酸酰基转移酶基因成熟蛋白原核表达载体大肠杆菌酶催化反应薄层色谱催化合成活性检测粮油作物三酰甘油诱导培养重组表达关键酶体外酶藻细胞构建应用蛋白合成克隆转化