本发明涉及一种碱性磷酸酶突变体及其制备方法和应用。该碱性磷酸酶突变体包括：由野生型碱性磷酸酶发生如下突变中的至少一种得到的多肽，野生型碱性磷酸酶的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示，突变包括：第51位的赖氨酸被天冬酰胺替代、第113位的组氨酸被谷氨酸替代。通过将第51位的赖氨酸被天冬酰胺替代或者将第113位的组氨酸被谷氨酸替代，能减弱野生型碱性磷酸酶蛋白分子二聚体界面处的氢键强度，从而减弱了酶的热稳定性，提高酶的热敏感性。经试验验证，与野生型碱性磷酸酶相比，本研究的碱性磷酸酶突变体的稳定性和比活力均有大幅度提高，蛋白比酶活大于1200U/mg，65℃15min可以完全失活。
本发明涉及一种胱硫醚‑β‑裂解酶及其制备方法和应用。该胱硫醚‑β‑裂解酶，包括：氨基酸序列如SEQ ID No.5～SEQ ID No.6所示的多肽中的一种。本研究预料不到地发现，包括氨基酸序列如SEQ ID No.5～SEQ ID No.6所示的多肽中的一种的胱硫醚‑β‑裂解酶兼具较高的热稳定性和酶活力。经试验验证，氨基酸序列如SEQ ID No.5所示的胱硫醚‑β‑裂解酶的蛋白比活力为127.4U/mg，在50℃下的半衰期为135.3min，氨基酸序列如SEQ ID No.6所示的胱硫醚‑β‑裂解酶的蛋白比活力为98.9U/mg，在50℃下的半衰期为31.2min。
