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[发明专利]一种新的测定核糖体失活蛋白的酶活性的方法-CN201910341894.3有效
发明人：孟尧;孟延发 -专利权人：成都医学院
申请日： 2019-04-25 - 公布日： 2022-10-25 - 主分类号： C12Q1/34 文献下载
摘要：本发明提供了一种测定核糖体失活蛋白活性的方法，包括如下步骤：(1)取核糖体失活蛋白(RIP)与三磷酸腺苷(ATP)于合适温度和pH下反应；(2)使步骤(1)的产物与偶联酶试剂反应；(3)测定550nm处的光吸收值；所述合适温度为53～62℃；所述合适pH为1～3；所述偶联酶试剂(ECR显色剂)含有催化量的腺苷脱氨酶(ADA)、过氧化物酶(POD)、黄嘌呤氧化酶(XOD)，以及过量的4‑氨基安替比林(4‑AA)和N‑乙基‑N‑(2‑羟基‑3‑磺丙基)‑3‑甲基苯胺钠盐(TOOS)。本发明使用ATP为底物，能使核糖体失活蛋白充分发挥其N‑糖苷酶活性，生成大量游离的腺嘌呤，通过检测腺嘌呤有效实现核糖体失活蛋白，包括I型、II型和III型RIP的酶活测定，具有良好的应用前景。
一种测定核糖体蛋白活性方法

[发明专利]一种同时制备苦瓜α-MMC和MAP30的方法-CN202011568116.7有效
发明人：孟尧;孟延发;王济源 -专利权人：甄融生物科技（上海）有限公司
申请日： 2020-12-25 - 公布日： 2022-09-02 - 主分类号： C12N9/24 文献下载
摘要：本发明属于生物技术领域，具体涉及一种同时制备苦瓜α‑MMC和MAP30的方法。针对现有技术中，制备单一种类苦瓜RIP的方法存在的缺陷，本发明提供了同时制备苦瓜α‑MMC和MAP30的方法，其包括如下步骤：制备酶粗提取液、选择性热变性和酸碱变性、硫酸铵粗分级分离、离子交换与亲合色谱分离和疏水色谱分离。本发明还提供上述方法制备的α‑MMC和/或MAP30及其用途。本发明方法实现了同时从苦瓜中提取纯MAP30和α‑MMC，且得到的纯MAP30和α‑MMC的活性与现有同类产品活性相当，且提取的收率高，步骤简单，操作简便，成本低廉，适宜于工业化大规模生产。
一种同时制备苦瓜 mmc map30 方法

[发明专利]一种腺嘌呤含量及RIP活性测定方法-CN202011532874.3在审
发明人：孟尧;孟延发 -专利权人：成都医学院
申请日： 2020-12-22 - 公布日： 2021-04-30 - 主分类号： G01N21/31 文献下载
摘要：本发明属于酶工程技术领域，具体涉及一种腺嘌呤含量及RIP活性测定方法。针对现有RIP活性测定方法中存在的缺陷，本发明提供一种用于腺嘌呤测试的显色液，由黄嘌呤氧化酶和BCIP组成。本发明还提供腺嘌呤测试的方法，其将待测样品与黄嘌呤氧化酶和BCIP反应后，测试光吸收值。本发明还提供RIP活性测试方法：将RIP溶液与ATP或NAD+混合反应后测试溶液中的腺嘌呤浓度计算RIP活性。本发明可以用于检测生物样本中RIP的动态合成情况、发现新的RIP的存在、检测和跟踪分离纯化过程中RIP的去向等。
一种嘌呤含量 rip 活性测定方法

[发明专利]一种测定核糖体失活蛋白活性的方法-CN201610451601.3有效
发明人：孟尧;孟延发 -专利权人：成都医学院
申请日： 2016-06-21 - 公布日： 2019-08-09 - 主分类号： C12Q1/34 文献下载
摘要：本发明提供了一种测定核糖体失活蛋白活性的方法。本发明还提供了一种测定核糖体失活蛋白活性的显色液及其用途。本发明的核糖体失活蛋白测定方法操作简单、成本低，只需分光光度计就能完成定量测定过程，同时可避免传统RNA酶对反应的干扰，在核糖体失活蛋白的研究和开发领域，具有广泛的实际应用前景。
一种测定核糖体蛋白活性方法

[发明专利]聚乙二醇修饰的苦瓜籽核糖体失活蛋白及其制备方法-CN200910058700.5无效
发明人： 孟延发 -专利权人：四川大学
申请日： 2009-03-26 - 公布日： 2009-08-19 - 主分类号： C07K17/08 文献下载
摘要：本发明公开的聚乙二醇修饰的苦瓜籽核糖体失活蛋白，是一种免疫原性低、具有抗肿瘤和抗病毒活性的聚乙二醇和蛋白质的结合物，其特征在于在α-苦瓜素分子表面的氨基上连接有至少一分子聚乙二醇。本发明还公开了聚乙二醇修饰的苦瓜籽核糖体失活蛋白的制备方法。本发明提供的聚乙二醇修饰的苦瓜籽核糖体失活蛋白不仅保持了未修饰前苦瓜籽核糖体失活蛋白的60～80％抗肿瘤生物活性，且与未修饰的苦瓜籽核糖体失活蛋白相比其免疫原性和毒副作用已显著降低。本发明提供的制备聚乙二醇修饰的苦瓜籽核糖体失活蛋白的方法也简单方便，易于控制和规模生产。
聚乙二醇修饰瓜籽核糖体蛋白及其制备方法

[发明专利]用产朊圆酵母菌在诱导培养基中生产尿酸酶的方法-CN200710049089.0无效
发明人： 孟延发;王腾 -专利权人： 孟延发;王腾
申请日： 2007-05-14 - 公布日： 2007-11-14 - 主分类号： C12N1/16 文献下载
摘要：本发明是用产朊圆酵母菌在诱导培养基中生产尿酸酶的方法。培养基各组分的重量百分比及条件：斜面培养基(％)：牛肉膏0.1－0.5，蛋白胨0.5－2.0，氯化钠0.2－0.8，琼脂1.5－3.0；种子培养基：牛肉膏0.1－0.5，蛋白胨0.5－2.0，氯化钠0.2－0.8；液体发酵培养基(％)：蔗糖1.5－4.0，酵母膏0.2－2.0，蛋白胨0.5－2.0，氯化钾0.05－0.1，尿酸0.05－0.07。菌株经斜面培养，种子培养，液体发酵培养，收集菌体，采用聚乙二醇－硫酸铵双水相萃取和两步层析纯化即得到磷酸甘油氧化酶。
用产朊圆酵母菌诱导培养基生产尿酸酶方法

[发明专利]用诱导培养基链球菌制备磷酸甘油氧化酶的方法-CN200710049088.6无效
发明人：王腾;孟延发 -专利权人：王腾;孟延发
申请日： 2007-05-14 - 公布日： 2007-11-14 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：本发明是用诱导培养基链球菌制备磷酸甘油氧化酶的方法。培养基组分及培养条件：斜面诱导培养基由酵母提取物、蛋白胨、葡萄糖、磷酸氢二钾、甘油、琼脂、硫酸镁、氯化锰、氯化钠、pH6.8的混合盐溶液构成；种子培养基由酵母提取物、蛋白胨、葡萄糖、磷酸氢二钾、甘油、硫酸镁、氯化锰、氯化钠、pH6.8的混合盐溶液构成；发酵培养基由酵母提取物、蛋白胨、磷酸氢二钾、甘油、硫酸镁、氯化锰、氯化钠、pH6.8的混合盐溶液构成。菌株经斜面培养，种子培养，旋转摇床发酵培养，再进行放大培养后收集菌体，采用聚乙二醇－硫酸铵双水相萃取和两步层析纯化即得到磷酸甘油氧化酶。
诱导培养基链球菌制备磷酸甘油氧化酶方法