本发明属于基因工程和蛋白质工程技术领域，涉及一种定点突变的蔗糖磷酸化酶及其应用。本发明所述的定点突变的蔗糖磷酸化酶，由氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的蔗糖磷酸化酶(BiSPase)中制造点突变获得，所述点突变的突变位点是选自：第141位和/或第197位。优选地，其所述第141位的点突变为苏氨酸突变为半胱氨酸；所述第197位的点突变为甘氨酸突变为半胱氨酸。本发明所提供的蔗糖磷酸化酶变体酶的催化效率明显提高，从而可以提高L‑抗坏血酸葡萄糖苷的产率，降低生产成本，解决了现有技术中蔗糖磷酸化酶部分受体特异性低、酶活低的问题，具有广阔的工业应用前景。
本发明涉及真核基因表达的转录调控因子的应用，特别是涉及一种组成型启动子Pgap的转录调控因子Msn2p的应用。本发明公开了Msn2p作为负调控因子在提高宿主细胞中蛋白表达中的应用，所述Msn2p的氨基酸序列是由核苷酸序列为SEQ ID NO:1的Msn2基因所编码的；所述应用为通过敲除Msn2基因从而提高宿主细胞中蛋白的表达。本发明所述的应用能通过减少阻遏作用来增强毕赤酵母表达系统中组成型启动子Pgap转录调控，进而提高目的蛋白的表达效率和产量。
本发明涉及一种特异性识别血管内皮生长因子(VEGF)的核酸适配体与该核酸适配体的用途。本发明所述的核酸适配体，具有如SEQ ID NO.1所示的核酸序列，所述核酸适配体能特异性识别血管内皮生长因子。本发明还提供所述的核酸适配体用于制备癌症诊断试剂中的用途，以及用于制备治疗癌症的药物中的用途。本发明对随机文库进行筛选，最终得到对VEGF165具有良好亲和力的适配体，该适配体具有抑制VEGF165诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖的效果，在肿瘤的检测和治疗中有潜在的应用价值。
本发明涉及一种特异性识别血管内皮生长因子(VEGF)的核酸适配体与该核酸适配体的用途。本发明所述的核酸适配体，具有如SEQ ID NO.1所示的核酸序列，所述核酸适配体能特异性识别血管内皮生长因子。本发明还提供所述的核酸适配体用于制备癌症诊断试剂中的用途，以及用于制备治疗癌症的药物中的用途。本发明对随机文库进行筛选，最终得到对VEGF165具有良好亲和力的适配体，该适配体具有抑制VEGF165诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖的效果，在肿瘤的检测和治疗中有潜在的应用价值。
本发明属于基因工程和蛋白质工程技术领域，公开了一种定点突变的α‑葡萄糖苷酶。本发明所述定点突变的α‑葡萄糖苷酶是在氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的α‑葡萄糖苷酶中制造两个氨基酸取代而产生的；所述的氨基酸取代是第120位和第215位的取代。本发明提供了所述的定点突变的α‑葡萄糖苷酶在制备2‑O‑α‑D‑葡萄糖基‑L‑抗坏血酸中的应用。本发明所述定点突变的α‑葡萄糖苷酶能够降低合成AA‑2G时副产物AA‑6G的含量，且提高了AA‑2G产量，其他酶学性质与野生型酶基本一致。
本发明涉及真核基因表达的转录调控因子的应用，特别是涉及一种组成型启动子Pgap的转录调控因子Gsm1p的应用。本发明公开了Gsm1p作为正调控因子在提高宿主细胞中蛋白表达中的应用，所述Gsm1p的氨基酸序列是由核苷酸序列为SEQ ID NO:1的Gsm1基因所编码的；所述应用为通过在启动子Pgap后插入Gsm1基因从而提高宿主细胞中蛋白的表达。本发明所述的应用能增强毕赤酵母组成型启动子Pgap启动子的转录，从而使其后的外源基因在毕赤酵母中高效表达，而且可以避免多拷贝或者多基因表达时，使用同一启动子产生的稀释效应，导致不同基因表达量差异过大。
本发明公开了一种对胰蛋白酶抗性提高的玉米赤霉烯酮水解酶，它是由氨基酸序列为SEQ ID NO.1的来源于粉红螺旋聚孢霉(Clonostachys rosea)的玉米赤霉烯酮水解酶中制造单个氨基酸取代而产生的、对胰蛋白酶抗性更强的酶，所述的氨基酸取代是第262位的取代。本发明通过蛋白质工程技术对野生型玉米赤霉烯酮水解酶分子内的关键氨基酸残基进行了改造，提供了一种对胰蛋白酶抗性提高的玉米赤霉烯酮水解酶突变体，该酶对胰蛋白酶的抗性半衰期比野生型玉米赤霉烯酮水解酶延长了20.8％，其他酶学性质与野生型玉米赤霉烯酮水解酶基本一致。
本发明公开了一种对胃蛋白酶抗性提高的α‑淀粉酶，它是由氨基酸序列为SEQ ID NO.1的来源于米曲霉的α‑淀粉酶中制造多个氨基酸取代而产生的、对胃蛋白酶抗性更强的酶，所述的氨基酸取代是第221和375位的氨基酸取代。本发明通过蛋白质工程技术对野生型α‑淀粉酶分子内的关键氨基酸残基进行了改造，提供了一种获得对胃蛋白酶抗性提高的α‑淀粉酶突变体，该酶对胃蛋白酶的抗性半衰期比野生型提高了2.54倍。突变型α‑淀粉酶的胃蛋白酶抗性是野生型α‑淀粉酶的胃蛋白酶抗性的1.42倍。突变型α‑淀粉酶的其他酶学性质与野生型α‑淀粉酶基本一致。
本发明涉及真核基因表达的转录调控因子的应用，特别是涉及一种组成型启动子Pgap的转录调控因子Hot1p的应用。本发明公开了Hot1p作为正调控因子在提高宿主细胞中蛋白表达中的应用，所述Hot1p的氨基酸序列是由核苷酸序列为SEQ ID NO:1的Hot1基因所编码的；所述应用为通过在启动子Pgap后插入Hot1基因从而提高宿主细胞中蛋白的表达。本发明所述的应用能增强毕赤酵母组成型启动子Pgap启动子的转录，从而使其后的外源基因在毕赤酵母中高效表达，而且可以避免多拷贝或者多基因表达时，使用同一启动子产生的稀释效应，导致不同基因表达量差异过大。
本发明涉及真核基因表达的转录调控因子的应用，特别是涉及一种组成型启动子Pgap的转录调控因子Ash1p在应用。本发明公开了Ash1p作为负调控因子在提高宿主细胞中蛋白表达中的应用，所述Ash1p的氨基酸序列是由核苷酸序列为SEQ ID NO:1的Ash1基因所编码的；所述应用为通过敲除Ash1基因从而提高宿主细胞中蛋白的表达。本发明所述的应用能通过减少阻遏作用来增强毕赤酵母表达系统中组成型启动子Pgap转录调控，进而提高目的蛋白的表达效率和产量。
本发明涉及一种特异性识别血管内皮生长因子(VEGF)的核酸适配体与该核酸适配体的用途。本发明所述的核酸适配体，具有如SEQ ID NO.1所示的核酸序列，所述核酸适配体能特异性识别血管内皮生长因子。本发明还提供所述的核酸适配体用于制备癌症诊断试剂中的用途，以及用于制备治疗癌症的药物中的用途。本发明对随机文库进行筛选，最终得到对VEGF165具有良好亲和力的适配体，该适配体具有抑制VEGF165诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖的效果，在肿瘤的检测和治疗中有潜在的应用价值。
