本发明涉及一种特异性产生新琼四糖的β‑琼胶酶及其应用。所述β‑琼胶酶为一种新型β‑琼胶酶AgaB6，氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明提供的β‑琼胶酶为一种人工设计的新型β‑琼胶酶，β‑琼胶酶AgaB6的N端为催化区（T1‑D306），C端设计了一段由150个氨基酸组成的铰链区（G307‑Y456），该区域可改变酶对底物的识别能力，可显著增强其降解产物的均一性。其氨基酸序列与已有的β‑琼胶酶序列相似度仅为54%。本发明所述的β‑琼胶酶AgaB6产物均一，降解产物中新琼四糖的比例高达92.3%。另外，本发明所述的β‑琼胶酶AgaB6性质稳定，产量大，具有一定的工业化应用潜质。
本发明涉及一种降解产物均一的内切型β‑琼胶酶及其应用。所述β‑琼胶酶为一种新型β‑琼胶酶AgaB1，氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明提供的β‑琼胶酶为一种人工设计的新型β‑琼胶酶，β‑琼胶酶AgaB1的N端为催化区（R1‑V392），C端为碳水化合物结合域（G393‑Y540）。其氨基酸序列与已有的β‑琼胶酶序列相似度仅为71%。本发明所述的β‑琼胶酶AgaB1降解方式为内切，具有产物均一的特性，降解产物中新琼四糖的比例高达90.5%。本发明所述的β‑琼胶酶AgaB1性质稳定，产量大，具有一定的工业化应用潜质。
本发明涉及一种具有热恢复特性的β‑琼胶酶及其应用。所述β‑琼胶酶为一种新型β‑琼胶酶AgaA1，氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，其N端含有一段铰链区（Met1‑Arg26），可以形成稳定的二级结构，从而对酶的热稳定性和热恢复性产生影响。其氨基酸序列与现有已知功能的β‑琼胶酶序列相似度仅为63%。本发明所述的β‑琼胶酶AgaA1具有热恢复特性，在煮沸5分钟后，放置在10℃孵育30分钟，可恢复其47.8%的活性。该酶最适反应温度为30℃，降解主产物为新琼四、六糖。本发明所述的β‑琼胶酶AgaA1性质稳定，产量大，具有一定的工业化应用潜质。
本发明涉及一种降解主产物为新琼二糖的内切型β‑琼胶酶及其应用。所述β‑琼胶酶为一种新型β‑琼胶酶AgaB10，氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明提供的β‑琼胶酶为一种人工设计的新型β‑琼胶酶，包含有350个氨基酸。其氨基酸序列与已有的β‑琼胶酶序列相似度仅为67%。本发明所述的β‑琼胶酶AgaB10降解方式为内切，具有产物均一的特性，降解产物中新琼二糖的比例高达86.2%。另外，本发明所述的β‑琼胶酶AgaB10性质稳定，产量大，具有一定的工业化应用潜质。
本发明涉及一种具有热恢复特性的β‑琼胶酶及其应用。所述β‑琼胶酶为一种新型β‑琼胶酶AgaA5，氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，N端为β‑琼胶酶的保守催化功能域（Asp1‑His630）。其C段设计了一段碳水化合物结合结构域区（Met631‑Pro806），可显著增强其热恢复特性。其氨基酸序列与现有已知功能的β‑琼胶酶序列相似度仅为77%。本发明所述的β‑琼胶酶AgaA5具有热恢复特性，在煮沸5分钟后，放置在冰上孵育30分钟，可恢复其60.1%的活性。该酶作用方式为内切，降解主产物为新琼四、六糖。本发明所述的β‑琼胶酶AgaA5性质稳定，产量大，具有一定的工业化应用潜质。
本发明涉及一种具有热恢复特性的β‑琼胶酶及其应用。所述β‑琼胶酶为一种新型β‑琼胶酶AgaA3，氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，其N端含有一段碳水化合物结合域（Met1‑Pro167），C端含有一段催化区（Met168‑Gly596）。其氨基酸序列与现有已知功能的β‑琼胶酶序列相似度仅为60%。本发明所述的β‑琼胶酶AgaA3具有热恢复特性，在煮沸10分钟后，放置在10℃孵育15分钟，可恢复其59.7%的活性。该酶作用方式为内切，降解主产物为新琼四、六糖。本发明所述的β‑琼胶酶AgaA3性质稳定，产量大，具有一定的工业化应用潜质。
