本发明提供了一种脯氨酸羟化酶及其应用。脯氨酸羟化酶包括(a)具有SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列的蛋白质；(b)SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列经过一个或多个氨基酸的突变且具有脯氨酸羟化酶活性的蛋白质；或者(c)保留(b)中的一个或多个氨基酸的突变，具有脯氨酸羟化酶活性，且与(b)中蛋白质的氨基酸序列至少具有78％的同源性的蛋白质。以SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列的蛋白质以及利用基因工程手段对其改造得到的突变体，具有比现有的脯氨酸羟化酶更高的催化专一性或者显著提高的催化活性。
本发明涉及基因工程技术领域，尤其涉及改进的酮还原酶突变体及其制备方法和应用，所述酮还原酶突变体具有(I)、(II)所示的氨基酸序列中任意一个：(I)与SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸序列；(II)与SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列的12至214位氨基酸经修饰、取代、缺失或添加一个或几个氨基酸获得的氨基酸序列；所述取代为取代1‑14个氨基酸；其中，所述突变体具有酮还原酶的活性。本发明中通过设计12至214位氨基酸的多个不同位点的突变，发现这些突变体提高了酮还原酶的活性、稳定性、可溶性表达、选择性、还可以降低酮还原酶的使用量。
本发明公开了一种酮还原酶突变体及其应用。该酮还原酶突变体的氨基酸序列是由SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列发生突变得到的氨基酸序列，突变至少包括如下突变位点之一：第6位、第94位、第96位、第117位、第144位、第156位、第193位、第205位、第224位、第176位、第85位和第108位；或者酮还原酶突变体的氨基酸序列具有发生突变的氨基酸序列中的突变位点，且与发生突变的氨基酸序列具有80％以上同源性的氨基酸序列。本发明酮还原酶突变体的稳定性高，尤其是对于丙酮和异丙醇的耐受性，使得它们在手性羟基杂环类物质的制备中，反应体系成分简化，成本降低，制备的手性醇ee值甚至高达99.8％。
