本发明提供了一种用于检测胎儿染色体非整倍体的试剂盒、引物和探针序列及检测方法。其中试剂盒包括:根据人类第13号、第18号和第21号染色体基因序列,设计的多对特异性引物和多条特异性Taqman探针;以及用于进行数字PCR的反应体系;其中,该多对特异性引物和多条特异性Taqman探针的核苷酸序列为SEQ ID NO:1‑90;其中检测方法包括(1)根据人类第13号、第18号和第21号染色体基因序列,设计多对特异性引物和多条特异性Taqman探针;(2)采集孕12‑23周孕妇外周血用于血浆DNA提取;(3)配制数字PCR扩增基因序列的反应体系;(4)通过数字PCR检测染色体数目计算胎儿13、18和21号染色体数目,利用数字PCR检测芯片每个反应单元的FAM和VIC荧光,分别计算13、18和21染色体的拷贝数。采用上述试剂盒和方法可以高效快速准确无创的完成对胎儿13、18和21号染色体数目的检测,有利于临床应用和推广。