本发明涉及一种稳定表达载体PB‑UFObow及其构建方法和应用,所述稳定表达载体PB‑UFObow含有SEQ ID NO:1所示的序列。本发明的稳定表达载体PB‑UFObow是通过对Piggybc转座子的酶切位点改造以及UFObow质粒的大片段连接而构建的,单次筛选获取的稳定表达细胞株采用单一波长激发可实现多色区别,可操作性强且缩短了多色肿瘤细胞株筛选所需的时间,易与激发波长在490nm之外的荧光染料或荧光蛋白联用,实现多分子信息的同步成像。利用稳定表达载体PB‑UFObow筛选的多色表达肿瘤细胞株,基于内源性荧光蛋白多拷贝整合实现40种可区分的标记颜色且复制的子细胞颜色与其母细胞一致。