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[发明专利]甲状腺癌辅助诊断和用药指导的检测试剂盒及检测方法-CN202111162079.4在审
发明人：罗喜鹏;吴炳义;冯俊清;高锋;刘晶星;姚芳;刘星沅 -专利权人：广州香雪南方精准医学科技有限公司
申请日： 2021-09-30 - 公布日： 2021-12-31 - 主分类号： C12Q1/6886 文献下载
摘要：本发明公开了一种甲状腺癌辅助诊断和用药指导的检测试剂盒，由外显子区域和TERT启动子区域检测组合组成；外显子区域为BRAF、DICER1、HRAS、IDH2、KRAS、NRAS、PIK3CA、RET、TP53外显子区域；该检测试剂盒能够检测10个基因。本发明还公开了甲状腺癌辅助诊断和用药指导的检测试剂盒的检测方法，包括以下步骤：(S1)核酸提取：孵育样品并收集样品DNA；(S2)文库构建：依次进行样品取样和打断，末端修复及加A反应，接头连接反应，连接后双筛，预PCR反应，预PCR反应产物钝化以及质检；(S3)杂交捕获、(S4)上机测序和(S5)生信分析。本发明检测区域放大到整个基因的外显子区域，大大提升了阳性样本的检出率从而为患者的用药指导和辅助诊断提供更好的帮助。
甲状腺癌辅助诊断用药指导检测试剂盒方法

[发明专利]以CA19-9 cDNA片段为模板制备RNA探针的方法-CN201610083165.9有效
发明人：徐学明;鲁隼;冯俊清 -专利权人：广州复能基因有限公司
申请日： 2016-02-05 - 公布日： 2020-05-01 - 主分类号： C12Q1/6811 文献下载
摘要：本发明提供了一种以CA19‑9 cDNA为模板制备RNA探针的方法。该方法包括以下步骤：针对CA19‑9 mRNA序列筛选多个靶序列，对于每个靶序列设计至少一对引物，所述引物的PCR扩增产物为多重DNA片段，所述多重DNA片段能包括所有靶序列；从CA19‑9 cDNA质粒中，采用上述引物，通过PCR扩增得到所述多重DNA片段，纯化后混合，作为模板；加入RNA聚合酶和带有生物素标记的UTP进行反应，将UTP掺入产物，纯化后得到RNA探针。本发明得到的cRNA探针能够全部覆盖所有靶序列，简化了探针制备步骤，大幅度缩短整个实验时间，探针特异性更高，稳定性更强，背景信号更低且灵敏度更高。在此基础上，本发明提供了一种快速检测胰腺癌相关的CA19‑9表达的试剂盒。
ca19 cdna 片段模板制备 rna 探针方法

[发明专利]以miR-196a前体为模板制备RNA探针的方法-CN201610082583.6在审
发明人：徐学明;鲁隼;冯俊清 -专利权人：广州复能基因有限公司
申请日： 2016-02-05 - 公布日： 2016-06-01 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：本发明涉及一种以miR-196a前体为模板制备RNA探针的方法。该方法包括：针对miR-196a前体序列设计至少一对引物，所述引物的PCR扩增产物为多重DNA片段，所述多重DNA片段能包括所有靶序列；从miR-196a前体cDNA质粒中，采用步骤A的所述引物，通过PCR扩增得到所述多重DNA片段，纯化后混合，作为模板；加入RNA聚合酶和带有生物素标记的UTP进行反应，将UTP掺入产物，纯化后得到RNA探针。本发明得到的cRNA探针能够全部覆盖所有靶序列。本发明探针制备方法简化了探针制备步骤，大幅度缩短整个实验时间，探针特异性和稳定性更强，背景信号更低且灵敏度更高。在此基础上，本发明提供了一种快速检测胰腺癌相关的miR-196a表达的试剂盒。
mir 196 模板制备 rna 探针方法

[发明专利]以MIC-1 cDNA为模板制备RNA探针的方法-CN201610087432.X在审
发明人：徐学明;鲁隼;冯俊清 -专利权人：广州复能基因有限公司
申请日： 2016-02-16 - 公布日： 2016-05-25 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明涉及一种以MIC-1cDNA为模板制备RNA探针的方法。该方法包括：针对MIC-1mRNA序列筛选多个靶序列，对于每个靶序列设计至少一对引物，所述引物的PCR扩增产物为多重DNA片段，所述多重DNA片段能包括所有靶序列；从MIC-1cDNA质粒中，采用上述引物，通过PCR扩增得到所述多重DNA片段，纯化后混合，作为模板；加入RNA聚合酶和带有生物素标记的UTP进行反应，将UTP掺入产物，纯化后得到RNA探针。本发明得到的cRNA探针能够全部覆盖所有靶序列，即MIC-1mRNA序列。本发明探针制备方法简化了探针制备步骤，大幅度缩短整个实验时间，探针特异性和稳定性更强，背景信号更低且灵敏度更高。在此基础上，本发明提供了一种快速检测肿瘤相关的MIC-1表达的试剂盒。
mic cdna 模板制备 rna 探针方法

[发明专利]以miR-155前体为模板制备RNA探针的方法-CN201610083241.6在审
发明人：徐学明;鲁隼;冯俊清 -专利权人：广州复能基因有限公司
申请日： 2016-02-05 - 公布日： 2016-05-18 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：本发明涉及一种以miR-155前体为模板制备RNA探针的方法。该方法包括：针对miR-155前体序列设计至少一对引物，所述引物的PCR扩增产物为多重DNA片段，所述多重DNA片段能包括所有靶序列；从miR-155前体cDNA质粒中，采用步骤A的所述引物，通过PCR扩增得到所述多重DNA片段，纯化后混合，作为模板；加入RNA聚合酶和带有生物素标记的UTP进行反应，将UTP掺入产物，纯化后得到RNA探针。本发明得到的cRNA探针能够全部覆盖所有靶序列。本发明探针制备方法简化了探针制备步骤，大幅度缩短整个实验时间，探针特异性和稳定性更强，背景信号更低且灵敏度更高。在此基础上，本发明提供了一种快速检测胰腺癌相关的miR-155表达的试剂盒。
mir 155 模板制备 rna 探针方法

[发明专利]以多重DNA片段为模板制备RNA或DNA探针的方法-CN201610083212.X在审
发明人：徐学明;鲁隼;冯俊清 -专利权人：广州复能基因有限公司
申请日： 2016-02-05 - 公布日： 2016-04-20 - 主分类号： C12P19/34 文献下载
摘要：本发明涉及一种以多重DNA片段为模板制备RNA或DNA探针的方法。该方法包括以下步骤：从体外转录的基因特异性cDNA或是基因组中特定基因DNA序列中筛选出多个靶序列，对于每个靶序列设计至少一对引物，所述引物的PCR扩增产物为多重DNA片段，所述多重DNA片段能包括所有靶序列；以所述多重DNA片段为模板，进行以下反应：加入RNA聚合酶和带有生物素标记的UTP进行反应，将UTP掺入产物，纯化后得到RNA探针；或者加入DNA聚合酶和带有生物素或萤光标记的dUTP进行反应，将dUTP掺入产物，纯化后得到DNA探针。本发明首次用多重DNA片段作为模板，针对待检测目标序列设计多对引物，并在反向引物5’端加上启动子或RNA聚合酶结合序列，以使最终得到的RNA探针能够全部覆盖靶序列。
多重 dna 片段模板制备 rna 探针方法