本发明公开一种用于检测古菌Hadesarchaea的引物对、试剂盒及方法,检测引物对包含上游引物Hade467F和下游引物Hade865R,上游引物Hade467F的序列号如SEQ ID NO:1所示,下游引物Hade865R的序列号如SEQ ID NO:2所示,试剂盒包括检测引物对、荧光试剂和阳性对照,方法包括提取待测样品的基因组DNA,利用试剂盒中的引物对进行PCR扩增;本发明通过设计的引物,可实现对古菌Hadesarchaea的定量检测,同时具有灵敏度高、重复性好、准确度高的特点,定量检测线性范围广,可以快速鉴定检测各种环境样品中古菌Hadesarchaea的存在。