本发明涉及基因检测技术领域,具体公开一种用于秋刀鱼源性成分检测的引物和探针组合、试剂盒及其应用。所述检测秋刀鱼源性成分的引物和探针中,上游引物的序列如SEQ ID NO:1所示,下游引物的序列如SEQ ID NO:2所示,探针的序列如SEQ ID NO:3所示。本发明通过设计的引物和探针组合,建立了一种针对秋刀鱼源性成分的实时荧光PCR检测方法,该方法的特异性强,与鳕鱼、罗非鱼、鲅鱼、巴沙鱼、金枪鱼、鲤鱼、三文鱼和低眼巨鲶等均无交叉扩增反应,灵敏度高、最低检测限可达10pg/μL,准确度好,对秋刀鱼的准确快速鉴别和食品安全保障具有重要的意义。