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[发明专利]一种去除疫苗中Vero细胞DNA的方法-CN201510810977.4在审
发明人：韩振;张振国;马廷涛;赵成;张星星;尹卫东 -专利权人：北京科兴生物制品有限公司
申请日： 2015-11-20 - 公布日： 2016-03-23 - 主分类号： C12N7/02 文献下载
摘要：本发明提供一种去除疫苗中Vero细胞DNA的方法。将用于制备疫苗的病毒液提纯后，加入MgCl₂，再加入Benzonase酶使其终浓度为18-72U/ml，于室温下以搅拌，静置酶切10-20小时，将酶切液入分子筛层析和超滤透析，得到病毒纯化液、精纯液，除菌过滤后得到疫苗原液。本发明方法处理后的疫苗原液平均回收率为86％，Vero细胞DNA残留量＜5pg/ml，疫苗原液的比活性平均值为365U/μg，其中Benzonase酶的残留量平均＜0.2ng/ml，本发明方法能够显著去除疫苗中Vero细胞DNA，且操作简单，成本低，安全有效，在疫苗制备领域具有广阔的应用前景。
一种去除疫苗 vero 细胞 dna 方法

[发明专利]病毒纯化放大方法-CN201511016482.0在审
发明人：范洁;姜东秀;塞伦苏;刘大钧 -专利权人：苏州药明康德检测检验有限责任公司;无锡药明康德生物技术股份有限公司
申请日： 2015-12-30 - 公布日： 2016-03-23 - 主分类号： C12N7/02 文献下载
摘要：本发明公开了一种病毒纯化放大方法，步骤包括：1)去除病毒中的细胞碎片；2)采用层析法捕获病毒；3)用核酸酶处理步骤2)捕获的病毒，酶解病毒中的宿主细胞核酸；4)对步骤3)处理后的病毒进行精细纯化，去除宿主细胞蛋白、核酸片段。本发明应用层析法实现病毒纯化放大，并在层析柱、层析填料方面进行优化，相较于传统病毒纯化方法，不仅提高了纯化后的病毒纯度和滴度，而且具有易放大、成本低的优点；所得低残留、高纯度、高滴度的病毒运用到病毒清除验证中，可增加病毒过滤膜的通量，降低病毒过滤膜的成本投入。
病毒纯化放大方法

[发明专利]在无血清悬浮细胞培养系统中生产重组慢病毒载体的可扩大的制造方法-CN201480016236.2在审
发明人：曲光;约翰·弗雷泽·莱特 -专利权人：费城儿童医院
申请日： 2014-03-17 - 公布日： 2016-03-02 - 主分类号： C12N7/02 文献下载
摘要：提供用于以满足人类基因治疗的预期需要的规模制备高纯度rLV载体制剂的方法。
血清悬浮细胞培养系统生产重组病毒载体扩大制造方法

[发明专利]一种纯化腺病毒颗粒的方法-CN201410490317.8在审
发明人：戴东升;杨仁佳;周鹏;焦进安;王星星;陈婧;王斐 -专利权人：亚宝药业太原制药有限公司
申请日： 2014-09-24 - 公布日： 2016-02-10 - 主分类号： C12N7/02 文献下载
摘要：本发明的目的在于提供一种高密度细胞悬液中去除宿主DNA的方法，以及合适的纯化腺病毒的方法。本发明筛选出一套简单可行的高密度细胞悬液中去除宿主DNA的方法，避免了加入阳离子洗涤剂而导致的腺病毒颗粒的聚集沉淀问题和阳离子洗涤剂对后续纯化的影响。
一种纯化病毒颗粒方法

[发明专利]一种大规模获得高纯度、高活性慢病毒的工艺方法-CN201510523086.0在审
发明人：易丹;吕斌;谢昌彬;宋侠侠 -专利权人：深圳市百恩维生物科技有限公司
申请日： 2015-08-24 - 公布日： 2016-01-06 - 主分类号： C12N7/02 文献下载
摘要：本发明提供一种大规模获得高纯度、高活性慢病毒的工艺方法，包括以下几个步骤：步骤A:收集慢病毒原液，过滤去除细胞碎片，澄清后的样品用于DEAE弱阴离子纯化柱上样；步骤B:通过DEAE弱阴离子纯化柱纯化；步骤C:将收集的初纯病毒液加入超滤系统样品杯，再通过凝胶过滤纯化柱纯化；步骤D:用过滤除菌，取适量样品进行纯度检测，感染滴度检测。本发明的有益效果是：通过初级纯化和精细纯化工艺，获得高纯度慢病毒颗粒，达99%以上；可实现更高的浓缩倍数；处理量大，实现规模化生产；采用改良的离子交换层析缓冲液，能保证终产物的高活性，减少纯化过程中慢病毒的失活。
一种大规模获得纯度活性病毒工艺方法

[发明专利]C型肝炎病毒颗粒形成促进剂和C型肝炎病毒颗粒的产生方法-CN201380062187.1在审
发明人：堀田博;青木千惠;胁田隆字;S.普拉蒂维;S.拉特纳;H.鲁克曼;K.利奥纳杜斯 -专利权人：国立大学法人神户大学;东丽株式会社;公益财团法人东京都医学综合研究所;印度尼西亚大学;印度尼西亚科学院（LIPI）
申请日： 2013-09-27 - 公布日： 2015-12-16 - 主分类号： C12N7/02 文献下载
摘要：本发明提供能够促进培养细胞中的HCV颗粒形成的HCV颗粒形成促进剂，进而提供一种HCV颗粒产生增强方法；另外提供一种抗HCV药物候选物质的评价方法和HCV疫苗的制造方法；本发明的HCV颗粒形成促进剂以抑制素或其药学上可接受的盐作为活性组分；通过将抑制素或其药学上可接受的盐添加至HCV感染培养细胞中，能够促进感染性HCV颗粒的形成、以及增强产生；另外，通过在该HCV颗粒形成促进剂和抗HCV药物候选物质的存在下培养HCV感染细胞，能够对抗HCV药物候选物质进行评价；进而，使用通过HCV颗粒产生增强方法产生的HCV颗粒而制造HCV疫苗。
肝炎病毒颗粒形成促进剂产生方法

[发明专利]改进的病毒纯化方法-CN201510475203.0在审
发明人： M.C.科菲 -专利权人：昂科利蒂克斯生物科技公司
申请日： 2005-10-21 - 公布日： 2015-11-18 - 主分类号： C12N7/02 文献下载
摘要：本发明涉及改进的病毒纯化方法。特别是涉及纯化呼肠孤病毒的方法。可以使用去污剂从细胞培养物提取感染性病毒，生产高滴度的病毒，然后可以通过简单的步骤，例如过滤和柱色谱，纯化病毒。还提供了根据本发明制备的病毒和包含所述病毒的组合物。
改进病毒纯化方法

[发明专利]一种病毒样颗粒的纯化方法-CN201510291894.9在审
发明人：姜春来;孔维;蒋丽萍;孙世洋 -专利权人：长春百克生物科技股份公司;吉林大学
申请日： 2015-06-01 - 公布日： 2015-11-04 - 主分类号： C12N7/02 文献下载
摘要：本发明涉及免疫学领域，尤其涉及一种病毒样颗粒的纯化方法。该方法将含有病毒样颗粒的液体依次经蔗糖浓缩、凝胶层析、陶瓷羟基磷灰石层析。陶瓷羟基磷灰石目前尚未见用于病毒样颗粒的纯化。而本发明应用陶瓷羟基磷灰缩短了纯化步骤，成功纯化出与天然病毒具有相似形态学特征的病毒样颗粒，纯化过程收率较高，纯化产物纯度良好。
一种病毒颗粒纯化方法

[发明专利]用于增殖动脉炎病毒的哺乳动物细胞-CN201380067525.0在审
发明人： L.古伊伦;C.C.施里尔 -专利权人：英特维特国际股份有限公司
申请日： 2013-12-20 - 公布日： 2015-11-04 - 主分类号： C12N7/02 文献下载
摘要：本发明涉及能够增殖动脉炎病毒的哺乳动物细胞，涉及使用动脉炎病毒感染此类细胞，涉及包括此类细胞的细胞培养物，并且涉及在此类细胞中增殖动脉炎病毒的方法。
用于增殖动脉炎病毒哺乳动物细胞

[发明专利]用带负电的颗粒对病毒制剂的色谱纯化-CN201380073720.4在审
发明人：彼得·加尼翁 -专利权人：新加坡科技研究局
申请日： 2013-02-22 - 公布日： 2015-11-04 - 主分类号： C12N7/02 文献下载
摘要：本发明涉及一种纯化包含期望病毒的样品的方法，所述方法包括以下步骤：(i)提供填充的色谱柱，其具有带负电的多孔颗粒，(ii)将所述柱平衡到所述样品中所述期望病毒待被洗脱的条件，(iii)使所述样品与所述填充的色谱柱接触，使得被施加到所述填充的色谱柱的样品体积小于或等于所述填充的色谱柱内的所述带负电的多孔颗粒的颗粒间空间，(iv)从所述填充的色谱柱洗脱所述期望病毒，其中所述期望病毒处于更纯的状态且处于所述填充的色谱柱平衡到的条件。
负电颗粒病毒制剂色谱纯化

[发明专利]一种重组单纯疱疹病毒的中空纤维纯化方法-CN201510183374.6在审
发明人：刘为勇;王涛 -专利权人：湖北创瑞生物科技有限公司
申请日： 2015-04-18 - 公布日： 2015-08-19 - 主分类号： C12N7/02 文献下载
摘要：本发明公开了一种有关重组单纯疱疹病毒的中空纤维纯化方法，其步骤为：收集经过Vero细胞扩增的病毒上清；病毒上清液中加入到Flotrex AP型中空纤维滤柱中过滤，收集过滤病毒液；将过滤病毒液再加入到Memtrex AP型中空纤维滤柱中过滤，收集过滤病毒液，分装冻存于-80度；取适量病毒冻存液，做蛋白电泳跑胶染色或Western blotting检测，鉴定纯化效果。本发明的优点：中空纤维膜过滤技术在病毒的浓缩和澄清方面也被广泛应用，它可以有效保护病毒分子的完整性和生物活性。本发明就是基于中空纤维膜的以上特性，采用两种孔径的中空纤维过滤膜结合使用的过滤方法，能快速高效的纯化浓缩重组单纯疱。
一种重组单纯疱疹病毒中空纤维纯化方法

[发明专利]一种重组单纯疱疹病毒的中试生产工艺-CN201510183385.4在审
发明人：刘为勇;王涛 -专利权人：湖北创瑞生物科技有限公司
申请日： 2015-04-18 - 公布日： 2015-08-19 - 主分类号： C12N7/02 文献下载
摘要：一种重组单纯疱疹病毒的中试生产工艺，本发明采用生物反应器（Bioreactor）CelliGen微载体悬浮培养的方式进行大规模细胞培养，经细胞种植、循环培养、病毒接种、介质补充、细胞收集和细胞冻融等生产流程，最终进行病毒纯化的生产工艺。优点是：在本发明中，由于采用了第二代生物反应器进行悬浮培养方式等一系列先进和严格的生产工艺，保证了高纯度、高得率和高生物活性的重组单纯疱疹病毒制剂的获得，为重组疱疹病毒作为基因治疗载体及临床应用提供了应用前景。
一种重组单纯疱疹病毒试生产工艺

[发明专利]一种重组单纯疱疹病毒的肝素亲和层析方法-CN201510183384.X在审
发明人：刘为勇;王涛 -专利权人：湖北创瑞生物科技有限公司
申请日： 2015-04-18 - 公布日： 2015-08-19 - 主分类号： C12N7/02 文献下载
摘要：一种重组单纯疱疹病毒的肝素亲和层析方法其步骤为：病毒上清滤除细胞碎片，使用聚醚砜膜盘式过滤器进行浓缩；浓缩液冻存于-80度冰箱；HR 5/5柱子填装肝素，再将浓缩后的样品解冻装入柱子中；洗脱。收集三个峰值洗脱液，冻存于-80度或液氮中。优点：采用肝素亲和层析就是利用它具有大量带负电荷的硫酸基团的分子特性，作为蛋白及病毒纯化中的亲和配体，选择性地结合病毒表面蛋白分子及其它分子，然后利用不同浓度的盐离子做梯度洗脱，以达到将病毒单独洗脱下来的目的。
一种重组单纯疱疹病毒肝素亲和层析方法

[发明专利]一种重组单纯疱疹病毒的纯化方法-CN201510183392.4在审
发明人：刘为勇;王涛 -专利权人：湖北创瑞生物科技有限公司
申请日： 2015-04-18 - 公布日： 2015-08-19 - 主分类号： C12N7/02 文献下载
摘要：一种重组单纯疱疹病毒的纯化方法，将在Vero细胞中扩增得到的重组单纯疱疹病毒上清液中加入5%的PEG8000，离心；沉淀用TNMC缓冲液溶解，并在溶液中加入n-十二烷基-β-D-麦芽苷促进沉淀的溶解；将浓缩的mtHSV溶液加于蔗糖密度梯度顶层，离心鉴定分析。本发明的优点：本方法结合了沉淀法和蔗糖密度梯度离心法，具有低成本，对病毒无损伤，纯化效果好等特性，成为一个可以推广开来的有效的病毒纯化方法。
一种重组单纯疱疹病毒纯化方法

[发明专利]离子交换色谱纯化口蹄疫灭活病毒抗原的方法-CN201510228052.9在审
发明人：张松平;苏志国;杨延丽;马光辉;李浩;张焱 -专利权人：中国科学院过程工程研究所
申请日： 2015-05-06 - 公布日： 2015-08-05 - 主分类号： C12N7/02 文献下载
摘要：本发明涉及一种从细胞培养液中分离纯化口蹄疫灭活病毒抗原的方法。该方法利用离子交换色谱填料上的带电基团与口蹄疫灭活病毒抗原溶液中不同带电组分的相互作用，将口蹄疫灭活病毒抗原和杂蛋白质、核酸分离，从而达到提纯口蹄疫灭活病毒抗原的目的。该方法操作步骤少，工艺稳定，纯化速度快，口蹄疫灭活病毒抗原收率较高，且易于放大与工业化规模生产，具有较大的实际应用价值。
离子交换色谱纯化口蹄疫病毒抗原方法