[发明专利]活性P40结合物在鼻腔途径给药中的应用

说明书

本发明涉及在鼻腔给药中有效的免疫制剂的生产。因此，本发明涉及载体蛋白的应用，当半抗原/载体蛋白结合物(conjugate)通过鼻腔途径施用时，该载体蛋白可改善对半抗原的免疫应答。

通过口服或鼻腔给药方式使用疫苗被认为对致病微生物的根除有很大的影响。特别地，使疫苗在应用上具有更大的适应性(热稳定性，无需注射的施用等)的任何修饰都将导致更为有效和更为广泛使用的疫苗接种。另一方面，通过粘膜途径进行免疫使得有可能诱导构成防止微生物侵入的第一道屏障的局部免疫。

目前，市场上的口服疫苗仅涉及减毒或重组的活载体：-抗脊髓灰质炎的四价口服疫苗，-抗伤寒的口服疫苗。

鼻腔或口服接种疫苗的方法在文献中已有描述。

例如，对下列物质的粘膜给药已进行过实验：相应于肺炎球菌(Pneumococcus)表面蛋白A的PspA(Briles D.E.,专利EP0,682,950)、血凝素丝(hemaglutinin filaments)(Capron A.，专利FR 2,718,750;Kimura A.专利EP 0,471,177;Shahin R.D.,美国专利7532327)、破伤风毒素片段(Dougan G.专利WO 93/21950)、和霍乱毒素B(CTB)。

脑膜炎奈瑟球菌(Neisseria meningitidis)一个外膜蛋白已被作为佐剂与半抗原混合用于鼻腔免疫(Van de Verg L.L.,感染和免疫(Infection and immunity)1996,64:5263-5268)。

意外地，本发明申请人发现来源于其它细菌的膜蛋白当其和抗原一起通过鼻腔施用时，可诱导具有令人满意强度和质量的免疫应答，足以用于制备疫苗。

为此，本发明的主旨是使用肠细菌膜蛋白OmpA的至少一个片段来制备拟通过鼻腔途径施用的药物组合物，以提高哺乳动物对抗原或半抗原的免疫性。

在本发明中，术语“OmpA”是指外膜A型蛋白(OmpA是外膜蛋白A,Outer membrane protein A)。

本发明的另一个主旨是使用克雷伯菌属(Klebsiella)膜蛋白的至少一个片段来制备通过鼻腔途径施用的药物组合物，以提高哺乳动物对抗原或半抗原的免疫性。

膜蛋白优选肺炎克氏杆菌(Klebsiella pneumoniae)的OmpA蛋白。

有利的是，根据本发明的肠细菌膜蛋白OmpA或克雷伯菌属膜蛋白的所述片段通过重组方法获得。

更有利的是，重组方法获得的所述膜蛋白或其片段经提纯后，可在下列去污剂之一存在的情况下复性：Zwittergent 3-14、Zwittergent 3-12和辛基吡喃葡糖苷，优选0.05％-2％(w/v)浓度的Zwittergent 3-14，最优选浓度接近0.1％的Zwittergent 3-14。

专利申请WO 96/14415显示肺炎克氏杆菌的主要膜蛋白，即称为P40的OmpA，与肽亚基抗原偶联，通过系统免疫途径有很强的免疫原性。在大肠细菌中以包含体形式表达的重组P40蛋白被命名为rP40。

在本发明中，尤其适合的蛋白包含序列SEQ ID No 1。

本申请人已证明，由于肠细菌肺炎克氏杆菌是一种非常广泛的病原体，故在所有成人中均发现抗P40抗体的应答。这种致敏有利于增强对在偶联了载体蛋白P40时施用的抗原或半抗原的抗体应答。该施用是在无佐剂情况下经鼻腔途径进行的。

根据本发明的所述抗原或半抗原可选自蛋白、肽、多糖、寡糖和核酸。优选地，这些物质来源于细菌或病毒。

因此，本发明适用于制备抵抗任何呼吸道致病微生物的疫苗，这些微生物例如选自RSV、副流感病毒(PIV)、流感病毒、汉坦病毒、链球菌、肺炎球菌和脑膜炎球菌。

根据本发明的抗原或半抗原将包括所述微生物的至少一个片段，例如蛋白片段。本领域技术人员将明了如何采用诸如以下实施例中描述的常规技术检测该片段是否能赋予所期望的免疫性。

特别地，本发明适用于制备抗RSV(或呼吸道合胞病毒)、尤其是人或牛的RSV的疫苗。在该情况下，根据本发明的抗原或半抗原包含病毒RSV的至少一个蛋白片段，特别是RSV的蛋白G的至少一个片段。

这种片段的序列特别描述于专利申请WO95/27787。

优选地，病毒RSV的所述蛋白片段选自具有SEQ ID No 2至SEQ IDNo 74氨基酸序列的片段。