[发明专利]鲨鱼软骨血管生成抑制因子及其分离纯化方法

说明书

本发明属医药技术领域，是一种鲨鱼软骨血管生成抑制因子及其分离纯化的方法。

成人血管生成通常只限于伤口愈合与女性的生殖周期过程，已经证明成人所有其他的血管生成都是病态的，并能导致广泛的病变，如肿瘤的生长、糠尿病性视网膜增生、内皮细胞恶变(如血管瘤)、动脉粥样硬化、以及关节炎等。

1971年哈佛大学教授波斯顿儿童医院研究员Judah Folkman提出“肿瘤生长是依赖血管的”，20多年的研究结果充分证明了这一理论。大部分正常人体内均有处于休眠状态的肿瘤，只有1mm³大小，不对人体构成威胁；只有当其生成新生血管，获得营养供应及转移途径，肿瘤才能生长和转移，威胁人体健康。

肿瘤的生长存在着无血管期和有血管期，在开始的无血管阶段，肿瘤组织以慢速线性方式生长，体积不会超过1mm³，在这一时期肿瘤细胞的增殖与凋亡处于一个动态平衡状态。在向有血管期过渡的开始阶段，肿瘤组织会释放出一种可溶性的血管生成刺激因子，诱导毛细血管内皮细胞增殖与迁移，以及血管内皮芽的形成与新生血管生成，致使肿瘤组织以指数方式生长。抑制血管生成可切断肿瘤的营养供应及血道转移途径，从而抑制肿瘤的生长和转移。

国外，特别是Folkman实验室对抑制新生血管进行多年研究，发现了一些细胞因子具有抑制新生血管．生成的效应，同时合成了一些能抑制血管生成的有机化合物，但大部分由于毒性较大而受到限制。后来，科学工作者将研究重点转到了天然存在的生物大分子，发现天然动植物和微生物中都可能存在有血管生成抑制因子(angiogen-esis inhibitory factor，AIF)。1994年Folkman实验室发现38KD的纤溶酶原片段一angiostatin能够特异抑制血管内皮细胞的增殖及新生血管生成，并能显著抑制Lewis肺癌转移灶的生长(O’Reilly M S，Holmgren L，Shing Y，et al．Angiostatin：A novelangiogenesis inhibitor that mediates the suppression of metastases by a Lewis lungcarcinoma．Cell，1994；79：315-328)。1997年他们又报道胶原XVIII的20KD的C-末端片段-endostatin具有同样的活性(O’Reilly M S，Boehm T，Shing Y，et al． En-dostatin：An endogenous inhibitor of angiogenesis and tumor growth．Cell，1997；38：277-285)。

软骨是动物机体的主要无血管组织，含有较丰富的血管生成抑制因子，早在80年代中期，人们就发现软骨能够抵抗肿瘤细胞的侵入，很少长肿瘤。1990年Moses报道从小牛气管软骨纯化均一的小牛软骨血管生成抑制因子，分子量为27650(Moses AM，Sudhalter J，Langer R．Identification of an inhibitor of neovascularization fromcartilage．Science，1990248：1408-1410)。后来他们也从培养的软骨细胞中获得分子量为35550的同功蛋白。由于牛软骨含量较少，加工困难，一直未见其产品进入临床或市场的报道。