[发明专利]人ATP酶ε亚基编码序列、其编码的多肽及制备方法

说明书

本发明涉及基因工程领域，具体地，本发明涉及一种新的人基因核苷酸序列。更具体地说，本发明涉及人ATP酶ε亚基的cDNA序列。本发明还涉及由该核苷酸序列编码的多肽，这些多核苷酸和多肽的应用，以及所述多核苷酸和所述多肽的生产方法。

F0-F1质子ATP酶是具有众多成员的一个大家族，广泛存在于原核生物的细胞膜，以及真核生物的线粒体和叶绿体等结构中，分为F0(膜整合部分)以及F1(催化部分)两个结构域，ε亚基是F1部分最小的一个亚基，对ATP酶的功能有抑制作用。

1981年Saraste M等首先测定了大肠杆菌ATP操纵子中编码ε亚基的基因核酸序列(Saraste M，et al.Nucleic Acids Res.1981 Oct 24；9(20)：5287-5296.)，1988年，Maryland大学的Hawthorne CA和Brusilow W.S.克隆了巨大芽孢杆菌的F0-F1-ATP酶，并测定了ε亚基的基因序列以及由此推导而出的氨基酸序列(HawthorneCA，et al.Biochem Biophys Res Commun.1988 Mar 15；151(2)：926-931.)。1990年剑桥大学的Vinas O.等人又从牛心线粒体中分离出F0-F1-ATP酶的ε亚基，测定了其cDNA序列，以该cDNA作探针的杂交试验显示鼠和人的基因组中均包含它的同源序列(Vinas O.，et al.Biochem J.1990 Jan 15；265(2)：321-326.)。1991年，法国的Arselin G.等分离出酿酒酵母线粒体的F0-F1-ATP酶的ε亚基，并测定了其氨基酸序列(Arselin G.，et al.J Biol Chem.1991 Jan 15；266(2)：723-727.)；1993年，法国的Guelin E.等人又对它的基因进行了克隆和测序(Guelin E.，et al.J Biol Chem.1993 Jan 5；268(1)：161-167.)。1996年，Hillier L.等公布了人类线粒体F0-F1ATP酶ε亚基的氨基酸序列(Genebank Acssesion No.3023354)。然而由于克隆cDNA存在着种种困难，所以在本发明之前没有人发现或公开过人类线粒体F0-F1-ATP酶ε亚基的基因序列。

本发明的目的就是提供一种人类线粒体F0-F1-ATP酶ε亚基的核苷酸序列。

虽然人线粒体F0F1-ATP酶的ε亚基已经被公开，但是由于人体细胞中存在数量巨大的mRNA，所以要分离出F0F1-ATP酶的ε亚基的编码序列是非常困难的。而且由于线粒体自身带有遗传物质，所以更增加了分离的难度。

本发明的发明人通过多年研究，终于分离出相应的编码基因，在此基础上完成了本发明。

本发明提供了一种新的多核苷酸序列，即SEQ ID NO.3中14-169位核苷酸，该多核苷酸编码人类线粒体F0-F1-ATP酶ε亚基。

本发明还提供了含有上述的DNA的载体，以及用该载体转化的宿主细胞。在一个具体例子中，该宿主细胞是大肠杆菌。在另一具体中，该宿主细胞是真核细胞。

本发明还提供了一种产生人类线粒体F0-F1-ATP酶ε亚基的方法，该方法包括：

(a)将编码SEQ ID NO.3中14-169位核苷酸所示的核苷酸序列可操作地连于表达调控序列，形成人类线粒体F0-F1-ATP酶ε亚基表达载体；

(b)将步骤(a)中的表达载体转入宿主细胞，形成人类线粒体F0-F1-ATP酶ε亚基的重组细胞；

(c)在适合表达人类线粒体F0-F1-ATP酶ε亚基多肽的条件下，培养步骤(b)中的重组细胞；

(d)分离出具有人类线粒体F0-F1-ATP酶ε亚基活性的多肽。

本发明还提供了上述DNA分子的反义序列。

本发明还涉及一种探针分子，它含有权利要求1所述的DNA分子中约8-100个连续核苷酸，更佳地12-50个连续核苷酸。

本发明的F0F1-ATP酶ε亚基被命名为hsATPe(GenBank Accession No.AF052955)。因为申请保密，所以该登录的序列在本申请之前没有对公众公开。