[发明专利]Ii合成的抑制

说明书

本发明的技术背景

对特定抗原的免疫应答是通过这些抗原的肽片断的识别被T淋巴细胞调节。在抗原呈现细胞(APC)中，加工抗原的肽片断变为结合在主要组织相容性复合物(MHC)分子的抗原肽结合部位。然后这些肽-MHC复合物被转移到细胞表面而被辅助细胞的或细胞毒性T淋巴细胞上的T细胞受体所识别(外源肽和呈现MHC分子的相邻表面)。

已经鉴定了两类MHC分子。类型ⅠMHC分子从内源性合成蛋白，如感染病毒，在大约类型ⅠMHC分子的合成时候从内质网中得到肽类。MHC类型Ⅰ复合的肽在CD8-正效细胞毒性T淋巴细胞上出现，然后其被活化并且可以直接杀死病毒-表达细胞。然而，MHC类型Ⅱ分子的抗原肽结合部位在合成时被不变体链蛋白[Ii,(Invariant Chain Protein)]阻断。这些MHC类型Ⅱ-Ii蛋白复合物被转移至后-Golgi区室，在那Ii通过蛋白酶解被释放并且特异性抗原肽结合在MHC类型Ⅱ分子上。这些抗原肽通常来自外源性抗原，这些抗原经过非特定胞吞或通过与抗原呈现细胞上的特定细胞表面受体的相互作用被内化。例如，B淋巴细胞上的表面免疫球蛋白识别未损的蛋白抗原。然后抗原被内化，消化并且结合在抗原呈现细胞中的MHC类型Ⅱ分子上。这些抗原肽-MHC类型Ⅱ分子复合物被再表达在抗原呈现细胞表面上并且由CD4-正效辅助细胞T淋巴细胞识别。然后辅助细胞T淋巴细胞经过物理接触帮助细胞毒T淋巴细胞和B淋巴细胞并释放细胞因子。

抗原肽与MHC类型Ⅱ分子的结合以几种方式通过不变体链(其在内质网中的合成时结合MHC类型Ⅱ分子)调节。Ii从后-Golgi区室中的MHC类型Ⅱ分子作为内源性抗原肽结合MHC类型Ⅱ分子的抗原肽结合部位的协同步骤通过蛋白酶解释放[Daibata等人，《分子免疫学》(Molecular Immunology)31:255-260(1994)；Xu等人，《分子免疫学》(Molecular Immunology)31:723-731(1994)]。Ii蛋白防止在细胞质中被衍生及被转移至内质网的内源性抗原肽的出现。这些内源性衍生的抗原肽不能结合MHC类型Ⅱ分子，因为Ii链阻断MHC类型Ⅱ分子的抗原肽结合部位直到它们到达特定后-Golgi区室，在那内源性抗原肽发生结合。Ii的区室蛋白酶解消化/释放发生在与具有抗原肽(得自特定选择的外源性抗原)的MHC类型Ⅱ分子的协同过程中。

在正常情况下，内源性肽(具有强烈导致自身免疫疾病的自身决定子)不能结合MHC类型Ⅱ分子，因为Ii蛋白总是与新生MHC类型Ⅱ分子共合成。因此，通过身体免疫监视系统甚至没有看到与自身决定子肽(在肽通常出现的表面上的抗原呈现细胞中被合成和加工的一种肽)的复合物。因此，就不能开发对这种决定子的耐受性。如果Ii蛋白的表达在某些易于自身免疫疾病的细胞类型中被抑制，这种内源性自身决定子可能变为由MHC类型Ⅱ分子呈现，开始自身免疫应答这些内源性抗原。通过在恶性细胞中的这种工程作用，对内源性肿瘤抗原的这种“自身免疫应答”可在治疗上用于限制生长或消除这些肿瘤细胞。

已经证明了在MHC类型Ⅱ-负效细胞中增加MHC类型Ⅱ表达的治疗效果[Clements等人，《免疫学》(Immunol.),149:2391-2396(1992)；Baskar等人，《(细胞免疫学》(Cell.Immunol.),155:123-133(1 994)；和Baskar等人，《实验药物学杂志》(J.Exp.Med.),181:619-629(1995)]。在这些研究中，MHC类型Ⅱ分子基因至MHC类型Ⅱ-负效鼠肉瘤的转染产生MHC类型Ⅱ-正效、Ii-负效肿瘤细胞系。将这些细胞注射MHC相容宿主中导致亲代肿瘤的生长延缓。Ii蛋白基因至肉瘤细胞系和MHC类型Ⅱ基因的共转染抑制MHC类型Ⅱ基因的肿瘤治疗效果，因为Ii链阻断内源性肿瘤抗原的出现。

本发明的概述

本发明一方面涉及表达逆基因构件，及寡核苷酸，其特征在于它们能与Ii mRNA分子杂交，因此抑制Ii mRNA分子的翻译。所涉及的这些组合物通常被称为Ii表达的抑制剂。通过对Ii的mRNA的作用，这些抑制剂在治疗细胞中降低了Ii蛋白表达多达约90％。降低Ii表达使MHC类型Ⅱ分子与内源性T细胞呈现抗原决定子结合，否则，这种决定子将永远不会被免疫系统看到。

本发明另一方面涉及含有Ii表达抑制剂的MHC类型Ⅱ-正效抗原呈现细胞。一类特别重要的MHC类型Ⅱ-正效抗原呈现细胞是恶性MHC类型Ⅱ-正效抗原呈现细胞(例如白血病，淋巴瘤和黑素瘤)。