[发明专利]基因表达抑制相关性DNA分子和新的蛋白质

说明书

技术领域

本发明涉及与基因表达的抑制有关的DNA分子和新的蛋白质。特别是，本发明涉及一种来源于I型人类T细胞白血病病毒的DNA分子和一种含有该DNA分子的质粒，该DNA分子具有基因表达抑制的功能。本发明还涉及一种蛋白质，其与I型人类T细胞白血病病毒基因LTRU5区上的转录抑制区结合；一种编码该蛋白质的结构基因；一种含有该基因的表达载体；一种导入了该表达载体的转化体；以及一种利用上述转化体的方法，该方法用于制备与I型人类T细胞白血病病毒基因LTRU5区上转录抑制区结合的蛋白质。此外，本发明还涉及一种含该蛋白质的抗病毒制剂和一种以该蛋白质表达作为指标的癌症检测方法。

背景技术

1980年，发现了人类第一种逆转录病毒，即I型人类T细胞白血病病毒(HTLV-I)。研究结果显示，该病毒感染引起多种疾病，例如成人T细胞白血病(ATL)、HTLV-I相关性脊髓病(HAM)和热带痉挛性下肢轻瘫(TSP)；研究结果还显示，此病毒感染人体后经过长时间才出现疾病的症状，平均潜伏期约40～50年。然而，对于其隐性感染和其导致疾病发作的机理知之甚少。

如同动物逆转录病毒，HTLV-I基因含gag区、pol区和env区三个区，但除此之外，HTLV-I基因还有一个tax/rex区。tax/rex区位于env区的下游，被认为在病毒基因的表达和ATL的发病中起重要作用。HTLV-I基因的初级转录本需经两次剪接才产生tax/rex  mRNA，该mRNA含有两个重叠的开放阅读框。其中一个开放阅读框翻译后产生称之为Tax的蛋白质，分子量为40kD，其除作用于细胞多种基因的启动子而激活转录外，还作用于病毒本身的LTR。另一个开放阅读框经翻译后产生27kD称为Rex的蛋白质，其控制转录后细胞核内病毒RNA的处理，并对未经剪接的mRNA转运至细胞浆起促进作用。

在编码Rex蛋白的同一个开放阅读框内，还有另一个起始密码子，从此密码子起始翻译，产生一种21kD的蛋白质，称之为p21X。发明者发现，p21X是由p21XmRNA翻译而来，而p21XmRNA是HTLV-I基因转录时只经一次剪接产生的mRNA，没有第二外显子(Orita等，《FEBS通讯》(FEBS Lett.)，295卷，127页-134页(1991))。然而，该蛋白质的功能不明。发明者进一步发现，p21xmRNA表达于HTLV-I感染细胞系中的一种突变的前病毒，该前病毒在包括gag、pol和env区的一个广泛区域内有缺失(Orita等，《核酸研究》(NucleicAcids Res.)，21卷，3799页-3807页(1993))。此外，发明者还发现，p21XmRNA也表达于HTLV-I感染病人的外周血淋巴细胞中的上述突变型前病毒。另一方面，已知来自完整前病毒的tax/rexmRNA却罕见表达于HTLV-I感染病人的外周血，而且只有用超敏感的逆转录-聚合酶链式反应检测法才能在体内检测到。然而，一旦将HTLV-I感染病人外周血淋巴细胞转至体外培养体系，其表达则增高而易于检测(Kiyodawa等，《美国国立科学院进展》(Proc.Natl.Acad.Sci.USA.)，82卷，8359页-8363页(1985))。而且，也已经发现，p21X mRNA在前述的HTLV-I感染病人外周血淋巴细胞中的表达，无论是培养前还是培养后，均处于相同的水平(Orita等，《普通病毒学杂志》(J.Gen.Virol.)，73卷，2283页-2289页(1992))。因此，可以认为，在体内p21XmRNA的表达不受抑制，而tax/rex mRNA的表达被抑制。