[发明专利]T细胞抗原受体V区域蛋白及其制备方法

说明书

本发明总的来说属于免疫学及医学领域，涉及全长度重组T细胞受体(TCR)V区域蛋白，涉及以工业规模量生产重组T细胞抗原受体V区域蛋白的表达载体，以及应用全长度重组T细胞受体V区域蛋白诊断和治疗免疫系统疾病和失调的方法。

1.T细胞抗原受体

对外来抗原的免疫反应，分为体液免疫(由B细胞介导)和细胞免疫(由T细胞介导)。B细胞用于识别抗原的受体分子是识别球形蛋白质构象表位的免疫球蛋白。T细胞上的抗原受体与免疫球蛋白相关，但结合与自身主要组织相容性复合物(MHC)分子相缔合的经处理抗原分子(Dembic等人，1986，Immunol.Today，7：308)。

TCR基因，如免疫球蛋白基因一样，由T细胞个体发育期间重排的编码区(或基因片段)组成(Chien等人，1984，Nature，312：31-35；Hedrick等人，1984，Nature，308：149-153；Yanagi等人，1984，Nature，308：145-149)。自从克隆过编码β-链的第一个cDNA以来，人T细胞受体β链基因座位得到广泛研究(Yanagi，Y.等人，1984，Nature 308：145-149；Hedrick等人，1984，Nature，308：149-152；Siu等人，1984，Cell，37：393-401)。该基因座位是含编码β链已知区域或结构域之区域的基因复合物，所述区域指：可变区(V)、多样性区(D)和连接区(J)。这些编码区同一个编码恒定区(C)的区域一起，参与体细胞重排(Chien等人，1984，Nature，309：322-326)。原位进行研究证实，TCRβ的座位位于7号染色体的7q35(Isobe等人，1985，Science，228：580)。目前估计，该复合物全长跨度超过600kb，并含有70-80个可变区片段(Cancannon等人，1986，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，83：6598-6602；Tillinghast等人，1986，Science，233：879-883；Kimura等人，1987，Eur.J.Immunol.，17：375-383；Lai等人，1988，Nature，331：543-546)。这些V区域基因片段前后与两个串联组织的区域相邻，所述组织区每个均包括一个D和一个C基因片段，接着是一簇6或7个J区域基因片段(Tunnacliffe等人，1985，Nucleic Acids Res.，13：6651-6661；Toyonaga等人，1985，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，82：8624-8628)。随着V、D、J编码区(基因片段)的成功DNA重排，翻译的β链多肽与TCRα链配对，并可在T细胞表面表达(由Kronenberg等人综述，见1986，Ann.Rev.Immunol.，4：529-591)。

TCRα和δ基因在人14号染色体上座位相邻。TCRδ编码区完全位于α基因座位中(Satyanarayana等人，1988，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，85：8166-8170；Chien等人，1987，Nature，330：722-727；Elliot等人，1988，Nature，331：627-631)。据估计至少存在45-50个Vα编码区(Becker等人，1985，Nature，317：430-434)，而仅仅只有约10个Vδ编码区(Chien等人，1987，前述文献)。外周血中，以二个Vδ编码区表达为主，即Vδ1和Vδ2。

γTCR基因首先在小鼠中(Saito等人，1984，Nature，309：757-762；Kranz等人，1985，Nature，313：762-755；Hayday等人，1985，Cell，40：259-269)，然后在人中(Lefranc等人，1985，Nature，316：464-466；Murre等人，1985，Nature，316：549-552)鉴定出来。人γTCR基因座位由5-10个V编码区，5个J编码区和2个C编码区组成(Dialynas等人，1986，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，83：2619)。