[发明专利]从赤霉素混合物中分段提取赤霉素A4和A7的方法

说明书

本发明涉及赤霉素各成份的分离提取工艺，特别是从微生物发酵的赤霉素过滤液中分段提取赤霉素A₄和A₇(GA₄、GA₇)的工艺。

目前已从自然界中发现82种赤霉素，按顺序排列为GA₁、GA₂、GA₃……GA₈₂，还有十多种组合型。这些赤霉素主要来自微生物和植物。目前活性最高的赤霉素种类都可从微生物中发现，如GA₃、GA₄、GA₇等等。微生物还具有生长迅速、制备容易、产量高等优点，所以商业赤霉素都来自微生物发酵所获得产品。微生物中几乎都以藤仓赤霉菌(Gibberella fujikuroi)作为生产菌。该菌的多数菌株都产生多种赤霉素，例如GA₃、GA₄、GA₇、GA₉、GA₁₃等。GA₃是最早开发应用的一种赤霉素，它对植物茎叶生长的促进作用活性最强。GA₄、GA₇对植物果实细胞伸长的促进作用最为明显，目前最主要的例子是用于使苹果果实增高，称之谓“高庄苹果”或“蛇果”的生产。这种“高庄苹果”由于形状美观，颜色鲜艳而深受消费者欢迎，售价高出普通苹果数倍至数十倍。赤霉素A₄、A₇的商品通常是两者的混合物，即GA₄₊₇形式。但GA₄₊₇产品中不能混有GA₃，否则就会在增高果实的同时引起枝叶的徒长而带来落花落果弊病。另一方面，GA₇和GA₄虽有相同的方面，但也有不同的作用，比如GA₇有抑制花芽分化的现象，而GA₄没有；在引起植物单性结实的效果方面，GA₄大于GA₇；此外，还有其它方面的不同作用。为了用户的不同需要，GA₄与GA₇的分离也势在必行。

GA₄₊₇的分离提取工艺，据目前所知，有两个专利，一是82年的日本专利59106478，二是64年英国专利1174924。前者的工艺要点是先经一般的赤霉素萃取，蒸出大部分乙酸乙酯，加入正丙醇，再加N-苄基甲胺得GA₄₊₇N-苄基甲胺盐沉淀，分出不发生沉淀GA₃。GA₄₊₇胺盐用甲醇水溶解，加酸加水使GA₄₊₇结晶析出。后一工艺是在发酵滤液中调pH4.2-5.5，乙酸乙酯萃取得GA₄₊₇，然后脱色浓缩，再在乙酸乙酯、2乙酯醚中结晶。

日本工艺需使用N-苄基甲胺、正丙醇、草酸等价格较高的化合物。其缺点是工序多，不能分离GA₄和GA₇。英国工艺的缺点是只分出GA₄₊₇,GA₄与GA₇也同样不能分离，纯度不够时需反复多次萃取，较繁杂。

本发明的目的是提供一种从微生物发酵滤液的赤霉素混合物中分离提取赤霉素A₄和A₇(GA₄、GA₇)的生产方法。

本发明的工艺是先将赤霉素发酵液在pH6.8-7.0的条件下浓缩20-30倍，调PH6.0，使GA₄沉淀，分离的滤液调PH4.5，使GA₇沉淀，再次分离出的滤液回收副产物GA₃后弃去。按这一工艺的特点称为分段提取法。由于赤霉素发酵滤液浓缩倍数高，每段提取过程使用乙酸乙酯很少。纯度不够时，只需用缓冲液清洗每一段的提取液，而不使用反复萃取的方法。