[发明专利]疫苗

说明书

本发明涉及新的疫苗制剂，及其生产方法以及该疫苗制剂在医学上的应用。特别是，本发明涉及一种水包油乳液。这种乳液包括生育酚、角鲨烯、吐温80、Span 85(司盘85)以及卵磷脂，并且具有有效的佐剂特性。含有一种来源于Quillaja Saponaria Molina的树皮的HPLC纯化的非毒性组分，QS21，和/或3脱氧酰基化的单磷酰脂A(3De-O-acylated monophosphoryl lipid A，3D-MPL)，以及这样的水包油乳液进行组合的疫苗也是本发明的一部分。

从GB 2220211(Ribi)知道了3脱氧酰基化的单磷酰脂A。从化学上说，它是一种具有4，5或6酰基化的链的3脱氧酰基化的单磷酰脂A的混合物，由Ribi Immunochem Montana制备。在国际专利申请NO.92/116556中公开了3脱氧酰基化的单磷酰脂A的一种优选形式。

QS21是一种来自南美的Quillaja Saponana Molina树的树皮的经Hplc纯化的皂角苷(Saponin)的非毒性组分，其生产方法公开(以QA 21形式)于美国专利NO.5,057,540中。

水包油乳液本身是现有技术中已知的，并且已有人建议可将其用作为佐剂组合物(EPO 399843)。

本发明是基于下列惊人发现，与现有技术的乳液不相同的本发明的水包油乳液，含有生育酚或者含有结合了QS21和/或3D-MPL的生育酚，从而增强了对给定抗原的免疫应答。这种增强作用比迄今为止以前的所有同类制剂能提供更好的免疫应答。

另外，当将本发明的水包油乳液与3D-MPL和QS21一起配制时是IgG2a产生和TH1细胞应答的优选的刺激剂。这是有利的，因为在细胞介导的应答中已知包含有TH1应答。的确在鼠中IgG2a的诱导是与这样一种免疫应答相关的。

例如以这种方式组合的HIV抗原gp120的疫苗制剂可强有力地增效诱导对gp 120蛋白质的特异的免疫应答。

观察到可能诱导强的细胞溶解的T淋巴细胞应答的结果很有意义，因为在一些动物模型中已经证明这种细胞应答诱导了抵抗疾病的保护作用。

本发明人已经证明，佐剂QS21和3D-MPL以及在一起的水包油乳液与一种抗原结合后在脾脏中导致对CS蛋白质特异性的CTL的强力诱导作用。QS21本身也增强了CTL的诱导，而3D-MPL不能。

当胞内合成靶抗原时(例如由病毒，胞内细菌产生的感染，或在肿瘤中)容易看到CTL的诱导作用，因为由抗原的蛋白质裂解产生的肽可以进入合适的加工途径，导致以与I类分子相结合形式呈现在细胞膜上。但是，一般来说，预形成的可溶性抗原没有到达该加工和呈现途径，并且没有诱导I类范围内的CTL。因此，可诱导抗体和T辅助应答的常规的非活性疫苗一般不能诱导CTL介导的免疫应答。两种佐剂QS21和3D-MPL与水包油乳液结合在一起能够克服基于重组蛋白质的疫苗的严重的局限性，并可诱导更宽范围的免疫应答。

已经证明在鼠模型系统中特异于CS蛋白质的CTL可抵抗疟疾(Romero等人，Nature 341：323(1989))。在人试验中，当将志愿者用恶性疟原虫的被辐射过的子孢子体进行免疫接种后，可显示出抵抗随后的疟疾的进攻，显示出诱导出了特异于CS表面抗原决定簇的CTL(Malik et al.Proc.Natl.Acad.Sci.USA 88：3300(1991))。

可诱导出对以重组分子形式给药的一种抗原具特异性的CTL的能力是与疟疾疫苗的研制相关的，因为基于免疫应答的产生及其特性，使用经辐射的子孢子体是不切实际的。

RTS是一种杂合蛋白质，它基本上含有借助于乙肝表面抗原的pre S₂部分的四个氨基酸连接到乙肝病毒的表面(S)抗原上的恶性疟原虫的环子孢子体(CS)蛋白质的整个C末端部分。其完整结构公开于共同待批国际专利申请NO.PCT/EP 92/02591，该申请要求了UK专利申请NO.9124390.7的优先权，其公开号为WO 93/10152。当在酵母中表达时产生出脂蛋白颗粒形式的RTS，并且当以与HBV的S抗原共表达时产生出已知为RTS，S的混合颗粒。

除了人免疫缺陷病毒和疟疾疫苗外，诱导CTL应答的能力有利于抗单纯性疱疹病毒，巨细胞病毒以及通常的具有胞内生活期的病原体的所有病例的疫苗。

同样，将重组肿瘤抗原和两种佐剂组合后可诱导特异于已知肿肿瘤抗原的CTL。这为研制抗癌疫苗提供了条件。