[发明专利]一种肌苷的分离方法

说明书

本发明涉及一种肌苷的分离方法，特别是一种从肌苷浓度低、杂质离子含量高的微生物发酵液中分离肌苷的方法。

目前国内外多采用离子交换柱上柱分离，炭柱浓缩后真空浓缩的方法从枯草杆菌发酵液中分离肌苷。由于发达国家的发酵技术较为先进，发酵液中的肌苷含量可高达30‰左右，使用上述工艺一般有较高的肌苷得率。而国内的发酵液含肌苷量一般为7～9‰左右，通常发酵液上离子交换柱时上柱量约仅为树脂体积的2～2.5倍，耗酸碱量大，肌苷上柱率低。离交柱的洗脱残余损失大，由于洗脱频繁，跑、冒、漏等外损失较大。一般国内厂家的肌苷得率约为65％左右，经济效益较低。

本发明的目的在于提出一种低浓度高含杂量的肌苷发酵液的分离方法，使离交过程中树脂上柱量大，肌苷得率高，提取的肌苷浓度高、减小耗酸碱量。

克服传统工艺方法的缺点的关键在于提高离交柱的上柱率的同时提高发酵液对离交柱的上柱量。在发酵液中含有较多的杂质离子，这些杂质离子在上离交柱的过程中被离交柱所吸附，占据了吸附位置，影响了吸附肌苷。本发明的核心思想是在上离交柱前先除去杂质离子。本发明包括对枯草杆菌发酵液进行阳离子柱上柱分离，经炭柱浓缩后真空浓缩的处理步骤，对所述的发酵液进行上述处理之前，先依次序进行下列预处理步骤：

(1)先用盐酸或硫酸或硝酸将发酵液的PH值调到1.5～6；

(2)然后对发酵液进行电透析处理，处理的最大电流为3.75A/dm²，每10立升溶液经4M²阴阳离子膜处理15～20分钟。

本发明的优点是在提高离子交换柱的上柱率的基础上，提高发酵液的上柱量到树脂体积的6倍以上，减小了洗脱残余损失和外损失，减少了酸碱用量，提高了分离所得的肌苷的浓度，提高了经济效益，尤其适用于目前国内厂家的肌苷生产技术的改进。

下面结合附图对本发明作进一步说明：

图1是离子交换柱的洗脱关系图。纵坐标P代表洗脱流出液的肌苷含量百分比，横坐标Q代表洗脱流出液体积，曲线1代表现有工艺下P随Q的变化曲线，曲线2代表本发明的工艺下P随Q的变化曲线。R代表洗脱接收的低限浓度。打斜线部分代表每次洗脱的残余损失。

参照附图：将肌苷发醇液(枯草杆菌发酵)用酸液处理，调节发酵液的PH值至1.5～6，所用酸液可以是盐酸、硫酸或硝酸。然后对发酵液进行电透析处理，处理的最大电流为3.75A/dm²，每10立升经4M²阴阳离子膜处理15-20分钟，得到较纯的含肌苷液。不同PH值的发酵液经电透析后肌苷得率D₁列成表一。将该含肌苷液上离子交换柱分离，离交柱直径为45厘米，高为62厘米，树脂体积为100毫升，型号可以是001×7树脂成氢型、DO31树脂成氢型或docitec—3树脂成氢型。不同PH值的含肌苷液的上柱率D₂列成表二。然后将离交柱用酸或碱洗释，电透析液和未电透析液的洗脱收率D₃列成表三。由于曲线2比曲线1丰满，代表洗脱残余损失的打阴影部分面积与总曲线下面积之比较小，亦即洗脱残余损失小。表四列出了不同PH值发酵液的总得率D＝D₁×D₂×D₃将分离所得肌苷经炭柱浓缩后真空浓缩。