[发明专利]禽霍乱蜂胶菌苗的制备方法

说明书

本发明禽霍蜂胶菌苗及制备方法属禽疫病制剂及其制备方法。

目前家禽霍乱主要用药禽霍乱菌苗存在的问题是免疫期短（一般为3个月左右）使用次数多（因介质为AL（OH），浓度为20～40亿/mL），产生作用的时间长（14天），保护率低（50～75%）等问题，因此，给家禽饲养业带来的危害深重，且造成经济损失。

本发明的目的是改变菌苗的介质，提供一种安全性好，无副作用，保护率高，免疫期长，产生作用时间短，使用方便的禽霍乱菌苗及制备方法。

一种禽霍乱蜂胶菌苗及制备方法，其特征在于工艺步骤为，一.制备菌液，1.选取菌种，2.育种，3.接种，4.配液，5.灭活，6.保存;二.制蜂胶液，1.选取蜂胶，2.溶胶，3.配液，4.保存;三.配制菌苗，取菌液保存液与蜂胶保存液混和，使含菌量为100亿/mL，含蜂胶干物质为10～15mg/mL的黄色混悬液，无菌分装后，置4～8℃冰箱内保存备用。

本发明可按下述方法实施：取菌种为由中国兽医药品监察所鉴定，保管和供应的A型多杀性巴氏杆菌，育种在血液马丁琼脂平板上划线培养（37℃，20～22小时）后，取4～6个标准菌落接种于血液马丁琼脂培养管斜面上培养（37℃18～24小时），于培养管中加入无菌生理盐水2ml，洗出菌苔到含血红素马丁琼脂的大扁瓶内培养（37℃，18～25小时），另用经12～18小时培养的马丁汤培养物或生理盐水洗下扁瓶内，培养好的菌苔，调整到菌液浓度为160～200亿活菌/ml，加入福尔马林使最终浓度为0.1～0.3%，再在37～39℃中灭活24小时，制成灭活菌液。

蜂胶佐剂的配制是如下进行的，取已知纯度的蜂胶磨碎，过筛后溶于95%的乙醇溶液中，再根据要求配比成适当浓度的溶液于4℃下保存。

再把上述方法配成的菌液与蜂液佐剂混合配成含菌量为100亿/ml，蜂胶干物量为10～15mg/ml的混悬液，无菌分装于100或500ml的菌苗瓶内，密封保存，检验合格后于4～8℃下保存备用。

本发明的优点在于，佐剂与浓度改变后使菌苗的保护率提高至80～100%，免疫期可延长到6个月，产生作用的时间短到5天，仅需注射一次即可达到安全有效。