[发明专利]生产葡糖基转移酶的抗体和含该抗体的预防龋齿组合物的方法

说明书

本发明涉及一种细胞结合的葡糖基转移酶，该酶与蔗糖反应并且催化合成水不溶性葡聚糖的反应，本发明还涉及纯化和生产这种酶的方法。

本发明还涉及一种对于Streptococcus mutans具有免疫活性的抗体，该细菌已知是诱发龋齿的病原菌，本发明还涉及含所说抗体作为有效成份的预防龋齿的组合物。

从预防龋齿的角度出发，已经对被认为是引起龋齿的细菌S.mutans进行了大量的研究，还对这种细菌在龋齿形成中有关的机制进行了大量的研究。

至于与形成龋齿有关的S.mutans菌株，现已发现了按血清分类可分为血清a至h的八种菌株。在这些血清型中，根据血清学的类似性，已确定了两个亚组，血清型a和g在一组，而血清型c，e和f在另一组。

早已了解到在S.mutans与形成龋齿有关的机制中，由蔗糖产生粘着的、水不溶性葡聚糖的过程是重要的过程，在这个过程中，由S.mutans产生的葡糖基转移酶(以下称GTF)起了重要作用。

这种由S.mutans产生的GTF既可在培养物上清液中找到，也可在已结合形式的细胞表面上找到。

例如，在血清型d或g株的培养液中，两者在血清学上相类似，在没有蔗糖存在的情况下，GTF几乎全部存在于培养物的上清液中。其中有三种GTF，即GTF-S1，GTF-S2和GTF-I，目前已得到分离和纯化(S代表一种水溶性葡聚糖合成酶，而I代表水不溶性葡聚糖合成酶)。这三种类型的GTF一起配合产生粘着的、水不溶性葡聚糖(如见“Synthesis of glucans by Streptococcus mutans a：d adherencemechanisms”T.Koga，Jap.J.Bacteriol.，41(4)，679，1986)。

此外，在蔗糖存在的情况下，血清型(d)和g株的培养物中，己知上述三种GTF几乎都是通过与葡聚糖连接而与细胞结合，从而得到细胞结合的型式(Hamada，S.and Slade，H.D.，Archs Oral.Biol.，24，399-402，1979)。

另一方面，GTF-S和GTF-I也已从血清学上彼此相似的血清型c，e和f系的培养物上清液中得以分离(Kuramitsu，H.K.and Wondrack，L.，Infect.Immun.，42，763-770，1983)。

然而，现在还没有一份有关不溶性的、粘着的葡聚糖能用这些GTF-S和GTF-I的联合作用来合成的报导。

此外，一直在努力研制防止龋齿的方法，把S.mutans作为靶生物体。一种已知的通过控制口腔中S.mutans的集群化(特别是通过控制与牙齿表面的粘着)来防止龋齿的方法的例子是一种使用对S.mutans有免疫活性的抗体来防止龋齿的方法。也就是通过使用已经用S.mutans细胞而获得免疫力的牛奶来防止口腔中S.mutans的集群化。这一方法已公开在英国专利说明书1505513号中。日本专利公开说明60-38327公开了一种由抗血清和/或用S.mutans培养物口收的组分如细胞壁而获得免疫力的哺乳动物的乳汁，以及选自葡糖基转移酶抑制剂、蛋白酶和葡聚糖酶中的一种或多种增效剂复合而成的龋齿预防剂。

然而，通过对S.mutans具有免疫活性的抗体来防止龋齿的效果，并不总是令人满意的，除此之外，还因为这类抗体通常是用免疫的哺乳类动物的乳汁或抗血清来制备的，在许多情况下，由于不适于成批生产或生产成本过高这样一些缺点，而不能实际生产。

为了建立一些更加有效的龋齿预防技术，本发明人一直将注意力集中于分布于人口腔中并被认为对人的龋齿形成起最重要作用的血清型c株，也对与血清型c在血清学上相似的血清型e和f株进行了研究。在各种用于说明这些菌株与形成龋齿有关的机制的研究过程中，本发明人已分离并纯化了在用这些细菌合成水不溶性葡聚糖的过程中起作用的GTF组分。而且，还从说明GTF的性质是很重要的角度进行了这些研究工作。

结果，本发明人证实了在由这些细菌产生的GTF组分中，存在细胞结合的GTF，它们具有水不溶性葡聚糖的合成酶活性(下文称之为CA-GTF-I)，这种活性在细菌与牙齿表面的粘着中，特别是在与蔗糖有关的粘着中可能起着重要作用。因此，本发明人力求分离和纯化这种CA-GTF-I。

此外，使用一些常规技术，分离血清型c、e或f株的细胞结合型的GTF-I成为纯化的酶蛋白，至今未能成功地实现，以便能彻底地研究它们的性质。