[发明专利]利用光散射技术的多部分鉴别分析方法及装置

说明书

本发明总地来说涉及微粒分析装置，更具体地说是涉及通过Coulter类型的技术而不利用细胞化学染色技术或材料来达到单个血细胞类型（例如白细胞的五种基本类型）的选择，区分和鉴别分类的装置和方法。

众所周知，利用流动细胞计数仪而不使用细胞化学染色，白细胞可被鉴别和划分为三个主要类型：即：淋巴细胞，单核细胞和粒细胞。有一种这样的方法包括使用低角度光散射与90°或高角度光散射相结合。某些方法利用了一种溶解试剂来从全血稀释液中除掉不需要的红细胞，其它方法则依靠密度或离心技术，如：利用ficolpague的单位比重分离法，其中ficolpague是合成多糖聚合物与（例如）泛影酸钠盐的混合物;或用葡聚糖分离，或用浅黄层技术，该浅黄层是指全血经离心后在顶层血小板和底层红细胞之间的浅黄层白细胞;等等。此外，某些方法利用细胞化学染色以便进一步细分按其免疫功能定义的淋巴细胞子类。

授予S·L·Ledis和H·R·Crews並转让给Coulter电子公司（Hialeah，Florida）的PCT专利PCT/US    85/00868号中描述了一个系统和技术，它利用试剂系统产生出被称为四种群鉴别的结果，其方式是将红细胞有效地从样本中除掉，由于溶解以及必要时的固定处理，使粒细胞的一个子群（即嗜酸性细胞）被分离出来，与其相对比，以上描述的技术中只有三个种群 可被看出或显现出来，随后嗜酸性细胞就与其它子群不能区别了。

先有技术中描述了一种获得四部分白细胞鉴别（淋巴细胞、单核细胞、中性白细胞和嗜酸性细胞）的方法和装置，它是通过将细胞进行细胞化学染色並经过低角度光散射和吸收的结合而产生出四个互不相同的群。吸收是轴向光损失的一个分量。

同样，如美国专利3，502，974号专利中所揭示的技术中是将电“混浊度”作为检测特定细胞或细胞群的一个独立的参数来描记，这三个种群仍然被鉴别出並被很好的限定和分离开。然而，在这种情况下，粒细胞子群的中性白细胞，嗜酸细胞，嗜碱细胞是在粒细胞群数据之内，它隐藏並掩盖了这三种细胞使其不能鉴别。

先有技术的文献，科学论文和报告中说明、描述和讨论了以相对于所利用的光束轴线的不同角位置上利用光散射技术夹照射和探查样本。然而，到目前可获得和考虑的大多数文献材料都将相对于光轴的光线夹角限制为0°-23°或90°，或二者並存。

本发明提供了一种新的、有用的、到目前为止非显而易见的生物细胞计数、测量和鉴别的方法和装置，用于将生物细胞样本中的细胞类型高速、精确地分析和彼此分离开。

总地来说，本发明提供了一种结构上的结合，其中一个生物样本以流体动力聚焦的微粒流的形式进入和通过一个点聚焦的电磁辐射能的波束（激光）。相对于激光能量的轴线适当定位的光响应装置提供了表明每个细胞通过的光输出脉冲。在流体流动通道内的电传导触点提供了附加的电脉冲输出作为每个细胞的Coulter    DC体积和RF/DCCoulter混浊度探查的结果。

利用适当的电子线路可将这些输出脉冲或信号结合起来以限定出至少五种不同类型的白细胞，将每一种细胞类型与另一类型有效地区 分开，尽管事实上某些统计学上不普遍的细胞子群可能被它们的总的细胞类型所掩盖或隐藏。

本发明还涉及了只利用光散射技术以及与Coulter类型的DC和RF技术相结合而产生的多个生物细胞类型的一个或多个数据表示。

更确切地说，本发明提供了利用从光响应脉冲发生组件导出的信息或数据的新型装置和方法，该组件被安排在一个被遮掩的激光束的输出区域，其相对于激光轴线的角度范围是从大约10°到大约70°，以下将其称为中角度光散射MALS。

本申请涉及下列专利和/或申请，並通过对其引证将其揭示出的本申请所依据的附加说明性细节结合在此，其中这些细节已被说明是必须的和所需要的。题为：“从全血样本中分离，确认和/或分析白细胞的方法及试剂系统”，美国专利申请号07/025，303，1987年3月13日提交，申请人为Stephen    L，Ledis等人，已转让给本申请的受让人。共同未决的美国专利申请，申请号为：07/025，337，申请日1987年3月13日，申请人：Wallace    H·Coulter等人，题为：“快速混合小容量以加强生物反应的方法和装置”。美国专利申请号06/921，654，申请日1986年10月21日，申请人：Wallace    H·Coulter等人，题为：“测量微粒的电阻和电抗的微粒分析器”，已转让给本申请的受让人。