[其他]用汽相过氧化氢来给活性细胞上面或附近的表面清除污染的方法

说明书

本发明涉及清除污染的方法，特别是用汽相过氧化氢清除污染的方法。

微生物体污染是当今人们在培育细胞组织培养物时所遭遇的最困难的问题之一。污染浪费时间和金钱，并导致有价值的细胞组织培养物的损失。除了污染问题之外，植物组织培养者还面临在培养之前对植物组织进行“灭病原”所引起的问题。目前，还没有不冒着损害植物组织本身的危险来对植物组织灭病原的便利方法存在。

因为已知的清除污染方法，例如蒸汽或氧化乙烯处理会破坏培养物，所以，还没有已知的对带有培养物的细胞组织培养箱在固有位置上清除污染，即在原有地点清除污染的方法存在。由于缺少在原地清除污染的能力，所以采用了各种技术来减小细胞组织培养物的污染机会。曾经设计过提供有垂直层状空气流通过培养容器的培养箱。这个层状空气流有助于阻止空气中的污染物接触细胞组织培养物。有一个制造者设计了一种带有铜箱壁的培养箱，它在适当条件下具有杀细菌和杀真菌的特性。然而，这种培养箱不能消除在空气中的、搁架上的或者各种细胞组织培养箱上的污染物。过去，曾经把抗菌素加到细胞组织培养物中以防止污染。然而，在细胞中会产生遗传或新陈代谢的改变，并且目前在所有可能的情况下都希望避免把抗菌素加到菌种生长培养基中。因此，需要一种方法，它能够在原地对带有培养物的细胞组织培养箱清除污染。

现在植物细胞培养者在培养实验之前还需使用粗糙的方法对植物细胞灭病原。目前的实验操作包括把样品在稀释的Chlorox（1%）、戊二醛、或者乙醛中浸泡高达30分钟。许多植物细胞不容易受到这些消毒剂的影响。然而，没有有效的替代方法存在。试试和改改是用来获得纯净培养物的一般方法。因此，需要一种方法，它能使植物细胞培养者在培养实验之前对植物细胞灭病原。

已经知道即使是低浓度的汽相过氧化氢也能对清除污染和消毒有效。虽然在过去汽相过氧化氢已被用于此目的，但是这样的使用还没有包括活细胞。例如，Coulter的名为“储藏面包房制品”的美国专利2，193，622，Moore等人的名为“过氧化氢蒸汽消毒方法”的美国专利4，169，123，以及Forstrom等人的名为“冷气消毒方法”的美国专利4，169，124。在这些专利中，汽相过氧化氢都被用于消毒，但都不是在含有活细胞的环境下使用。

围绕被固定的整个细胞已经使用液相过氧化氢，但这是为了增强氧化作用的目的而不是为了清除污染。例如Holst所著的“过氧化氢作为一种用于固定的Gluconobacter    oxydans的氧气源”，见“应用微生物学和生物工艺学22”，383-388页。这个方法的主要缺点是在过氧化氢转变成为氧气和水的酶分解之前浓度为（34mg/l）的液相过氧化氢破坏了大多数细胞。

显然，需要一种在原地清除污染的便利的方法，以及一种在培养之前对植物细胞灭病原的方法。

本发明是一种在预定区域内选择性地破坏生物体从而能够在原地清除污染的方法。气相过氧化氢以足够产生预定要达到的过氧化氢浓度的流量被导入预定区域，与此同时要防止在该预定区域内的过氧化氢压力或凝结的任何实质性改变。维持这个预定的过氧化氢浓度一段时期，使它足以破坏不想要的生物体。然后，在该时期过去之后并在所需要的生物体被过氧化氢损害之前把汽相过氧化氢从该区域排出。

本发明的方法可连同诸如培养箱和高压灭菌器等容箱一起使用。本发明的方法可供在该封闭区域内对所有外表面，包括放有细胞组织培养物的容器的表面清除污染或者消毒，以及在该封闭区域内破坏空气中的微生物之用。然而，要控制暴露时间和过氧化氢浓度以使细胞组织培养物不受汽相过氧化氢的影响。

按照本发明的一个实施例，它预先提出把所需要的生物体放在许多容器中，在每一个容器的开口处都有一个曲折的通道。监视汽相过氧化氢的预定浓度以及该预定浓度维持的时间，以使过氧化氢没有足够的时间通过该曲折通道而到达生物体。

按照本发明的另一个实施例，它预先提出把所需要的生物体放在许多容器中，在每一个容器的开口处都有一个过滤器。监视汽相过氧化氢的预定浓度以及该预定浓度维持的时间，以使过氧化氢没有足够的时间通过该过滤器而到达生物体。

在本发明的又一个实施例中，所需要的生物体被放在许多开口容器中。监视汽相过氧化氢的预定浓度以及该预定浓度维持的时间，以使过氧化氢对所需要的生物体灭病原而又不损害它们。