[其他]单个双层的脂质体的制备方法

说明书

本发明涉及单个双层脂质体的制备方法。更具体地说，本发明涉及一种生产单个双层并含有囊包生物活性物质的脂质体的改进方法。

脂质体在文献中作了广泛地叙述，它们的结构是众所周知的。它们由亲水脂分子如极性脂质所组成，其中包括磷酯酰胆碱、乙醇胺和绿氨酸、神经磷脂、心磷脂、质脂、磷脂酸和脑苷脂。使磷脂或其他合适的亲水脂分子在水或水溶液中膨胀以生成液晶可形成脂质体，它通常是多层结构，由被水相物质彼此分开的许多双层结构组成。另一类型的脂质体是众所周知的，它由单个的含有囊包水相物质的双层结构组成，也可称为单层小泡。在脂类膨胀时，如果水相中含有水溶性物质，它们就陷入双层脂质之间。

最近几年，应用脂质体作为化合物载体有很大的兴趣，对这些化合物有兴趣是由于它们具有某些生物学性质，比如药物、蛋白质、酶、激素以及诊断剂，此后称为“生物活性化合物”。

水溶性物质被囊包在生物分子层之间的含水空间。脂溶性物质被囊包在脂层中，而极性的头部基团可以伸进含水空间里，这些化合物的囊包可通过许多方法来达到。所用的最普通的方法包含通过有机溶剂的蒸发而使磷脂在烧瓶的壁上形成薄膜。当这薄膜分散在合适的含水介质中就形成了多层脂质体（亦称为粗脂质体）。进行合适的超声处理后，粗脂质体形成较小的类似闭合的小泡。

水溶性的生物活性物质通常是使形成的薄膜分散在该化合物的水溶液中而掺入的。未被囊包的化合物用离心、层析、透析或其他一些合适的方法除去。脂溶性的生物活性物质通常是在形成膜之前使它们与磷脂一道溶解在有机溶剂中而掺入的。如果这些物质在脂相中的溶解性不超过能与脂质结合的数量因而没有多余的物质存在，则用上述方法制备的脂质体，通常包含结合在脂双层中的大多数物质;脂质体与未囊包物质的分离就不需要了。

脂质体是包含一个或多个分散在水或电解质水溶液里的脂质层的脂质小泡。虽然它们被广泛地用于各种目的囊包生物活性物质，但脂质体通常用作药物的载体。所利用的脂质体有各种类型，它们由于脂质体的数目、大小、表面电荷、脂质组成及制备方法而不同。

Bangham等人描述了制备多层脂质小泡的一种方法〔（J.Mol.Biol.13：238-252（1965）〕。多层脂质小泡由许多被含水介质相互分散的双分子层组成。脂类和亲脂性物质首先溶解在有机溶剂中，溶剂在减压下通过施转蒸发除去，残余脂质在容器壁上形成一层薄膜。加入通常含有电介质或亲水性生物活性物质的水溶液，搅拌混合物时则形成大的多层脂质体。大的多层小泡通过超声处理能制备小的单层小泡。

另一种方法是，使脂类和水溶液的混合物加热，再进行剧烈搅拌及超声振动。O.Zumbuehl和H.G.Weder叙述了一个方法，其中脂类和添加物通过振动或超声处理溶于去污剂中，产生一定的混合胶粒。去污剂用透析法除去〔（Biochem.Biophys.Acta.640：252-262。（1981）〕。最近，在美国专利4235871中描述了用反相蒸发技术制备大的单层脂质小泡的方法。通过这个技术形成油包水型乳剂。在减压下除去有机溶剂，产生有胶状特性的混合物，它能通过搅拌或通过分散在含水介质中转化为脂质小泡。

制备单层小泡的几种技术已有报导。例如，对磷脂的水相分散体进行超声处理产生由双层组成的或由磷脂包围水相空间的微小泡。〔（Papahad-Joponlos和Miller，Biochem.Biophys    Acta.，135：224-238（1968）〕。

所有上述方法在实验室规模上产生可重复的脂质体。用已知的步骤依赖现有设备扩增为生产规模常常是困难或完全不可能的，这部分是由于很难重复产生脂质体生成的物理条件。克服此问题的一个方法包括使用由D.Deamer和A.D.Bangham〔（Biochem.Biophys.Acta;443：629-634。（1967）〕所叙述的乙醚灌输技术。在此过程中含脂的乙醚快速注射到60℃的缓冲液中，当乙醚蒸发后则自动形成单层脂质体。注射方法简单而且快速，但产生的脂质体制品的浓度相对较低，而且囊包的效率较低。

制备小的单层小泡而避开超声处理的另一个方法是乙醇注射技术〔（S.Batzri和E.D.Korn.Biochem.Biophys.Acta;298：1015-1019，（1973）〕。通过向水中注射磷脂的乙醇溶液的方法制备单个双层脂质体，悬液用超过滤浓缩，乙醇用透析法除去。

美国专利4206197中叙述了包膜化学物质的方法，使脂肪与水溶性溶剂、表面活性剂及需包膜的化学物质混合。然后，将溶液加压注射至水相中，但用这种方法所形成的产品是胶状悬液。