[其他]用作疫苗和诊断标记的淋病奈瑟氏菌植物凝血素及其制备方法

说明书

本发明有关一种适用于抗淋病奈瑟氏菌（Neisseria    gonorrhoeae）的接种物或疫苗的植物凝血素，有关一种含有植物凝血素的疫苗，及有关诊断淋病的方法。具体地说，本发明有关可从淋球菌得到的淋病奈瑟氏菌植物凝血素，并有关分离凝血素的方法，有关从它们制备的一种接种物和/或疫苗;以及有关生产上述凝血素的方法。

据报导因淋病奈瑟氏菌（N.g）感染，年发病率估计有200万例。人体中淋球菌感染通常导致相对未并发的泌尿生殖系统的感染。又报导了在淋病方面，因淋病菌传播感染发病率达1-3%，但是这类疾病症状用现行的治疗方法效果很差。

另一方面，在妇女中因淋病感染，输卵管炎的发病率占10-20%，甚至在适当治疗后，可能产生输卵管炎复发、子宫外孕和不育症。估计在美国每年因输卵管炎导致有180万职员请私人医生治疗，有22万人住院治疗。

依靠公共卫生措施控制淋病至今还是困难的。Greenburg等在“世界卫生组织通报”45：531页1971年发表文章“开展淋球菌疫苗的初步研究”报导了由全部杀死的淋球菌制成的疫苗毫无疗效。

抗淋球菌的青霉素和四环素菌株也已问世。

淋球菌感染包括由细菌粘膜的移生，一种依靠移生细胞粘合力传递至膜表面的过程。术语“粘合力”意指细菌附着于表面比较稳定。有如此粘附活性任何可靠结构都称做粘接物。

淋球菌伞毛是一种具有由相同重复亚单元）伞毛蛋白-pilin）组成的丝状结构的粘着物。在N.g的MS11菌株中，每个伞毛蛋白的分子量约18，000道尔顿，淋球菌与上皮表面结合可能被抗伞毛抗体封阻。除封阻细胞的结合外，对伞毛蛋白产生的抗体也就是调理素，即它们通过血液中的各噬细胞，杀死侵入细菌。然而，由于缺乏通过不同N.g菌株形成的伞毛的血清交叉反应，因而提出使用伞毛免疫剂作为疫苗是不实际的。

我们发现，真核生物细胞表面糖〔神经〕鞘脂类，如：乳糖基神经酰胺，异球丙糖基神经酰胺（isoglobotri    sylcetamide），神经节丙糖基神经酰胺（gangliotriocylcoramide）和神经节丁糖基神经酰胺（gangliotetraosylceramide），均包括在N.g.的识别和粘合力之中，此外，还发现糖脂的直接识别可借助于至今未报导过的细菌植物凝血素，一种具有能识别特殊糖类系列（碳水化合物结构）并与之结合的细菌蛋白。这种细菌植物凝血素，当用于接种物、疫苗的组成，或用于诊断鉴定时，没有上述提到的伞毛免疫剂的缺点。

本发明企图分离名为GCL-1的细菌植物凝血素。这种植物凝血素可从淋球菌中得到，并与真核生物糖类相结合，相对分子量约为22400道尔顿。该植物凝血素的等电点pH值约6.1-6.4，它具有与神经节丁糖基神绿酰胺特殊结合的能力，并用作为抗淋病的接种物和疫苗的组成。这种植物凝血素也用于淋病的诊断方法。这种植物凝血素可以其分离形式或其在药物上可接受的盐的形式使用。

另外，本发明旨在由上述提到的分离的植物凝血素或其在药物上可接受的盐及其在药物上可接受的载体组成的接种物和疫苗。还提出一种抗淋球菌感染的免疫方法，即通过给病人施用有效量的、在药物上可接受的载体或稀释剂中含有上述分离的植物凝血素或其盐。

本发明进一步提出了分离GCL-1植物凝血素的DNA片段及存在于生物宿主和培养物中同样的DNA片段，在该培养物中上述生物宿主同适宜于表达GCL-1编码基因的该GCL-1编码基因存在于表达载体中，同时包含在合适的表达介质中。

附图系本发明的公开部分：

图1是涂银的具有标记蛋白质分子量位置的12%十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳的（SDS-PAGE）凝胶照片，并以其各自的相对分子量以1千道尔顿为单位表示在图的右面。

带A含具有相对分子量约18000道尔顿的纯伞毛蛋白。

带B含有本发明从实例1得到的粗品GCL-1提取物中亲合吸收后剩余的蛋白质样品。在检测方法的范围水平内没有证明GCL-1的存在。然而，在18000分子量的位置上可以看到伞毛蛋白。

带C含有存在于22400道尔顿位置上亲合分离的GCL-1。不存在大量伞毛蛋白或与其相结合的蛋白。

带D含有按实例1叙述的须经红细胞糖苷脂亲合分离的粗品GCL-1萃取溶液洗脱液。该溶液用作对照检测与糖脂亲合基质的非特异结合。在该带中不存在显著量的GCL-1，表明GCL-1与神经节丁糖基神经酰胺亲合基质的结合是一种特殊的植物凝血素-配位体相互体作用。