[其他]庆大霉素组分比例合适的菌株A2及其选育

说明书

本发明属于微生物菌种的选育。

国产庆大霉素和国外艮他霉素（即庆大霉素）都是由小单孢菌产生的一族多组份的氨基糖甙类抗生素。临床上使用的制品其主要组份是C₁、C_1a、C₂。由于各组份化学结构不同，所表现的毒性也不同，因此控制庆大霉素产品中组份的相对含量关系到药物的治疗效果。

美国专利（U.S.Patent 3，651，042（1972））介绍艮他霉素的主要组份：C₁含量约为25%-50%，一般为40%;C_1a含量约为15%-40%，一般为25%;C₂含量约为20%-50%，一般为35%。1967年我国分离出庆大霉素产生菌绛红色小单孢菌，1969年投产以来，我国各有关药厂生产的庆大霉素C₂比C₁的含量高，因此药品的毒性较大。开封制药厂柳世儒（<抗生素>8（1）28-32（1983））根据C₁、C_1a、C₂的化学结构中C₁含甲基数最多这一事实，在摇瓶发酵中添加DL-甲硫氨酸，提高了庆大霉素C₁的含量。但由于甲硫氨酸价格昂贵，无法在工业上推广。

本发明的目的是从改变菌种特性出发，筛选抗甲硫氨酸结构类似物的突变型菌株，用这种简便的筛选方法，获得庆大霉素组份比例合适的菌株。

本发明用亚硝基胍（其他任何诱变剂都可以）诱变庆大霉素生产菌株，再在含甲硫氨酸结构类似物（如乙硫氨酸等）的培养基上筛选抗甲硫氨酸结构类似物的菌株。甲硫氨酸结构类似物对庆大霉素生产菌株具有抑制生长的作用，根据代谢调节理论，可以预期抗甲硫氨酸结构类似物的突变型菌株能使菌株内合成更多的甲硫氨酸，成为提供更多甲基的来源，从而在不改变培养基成份的条件下，使含甲基多的庆大霉素C₁含量增加。

我们用亚硝基胍诱变庆大霉素生产菌株＃72，经诱变的＃72菌株在基本培养基上长成孢子，然后取样放在含甲硫氨酸结构类似物（如乙硫氨酸等）的培养基上生长，长出的抗性菌落经纯化后，接斜面长孢子。上述的培养温度和培养时间不必很严格，只要能形成菌落的培养条件都可以;培养基中甲硫氨酸结构类似物的浓度在50微克/毫升以上，一般在50微克/毫升到5000微克/毫升。

用上述方法我们筛选到三株抗乙硫氨酸的突变型菌株A₂（Micromonspora purpurea A₂）。肉眼观察：无气生菌丝体，菌落突起，生长丰茂，表面深红褐色，反面赤褐色;显微观察：菌丝体长，分枝，无分隔，直径约为0.5微米。

绛红色小单孢菌突变型菌株A₂已于1986年11月22日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号CGMCC0118。

我们用发酵液纸层析，生物显影的办法测定庆大霉素C₁、C_1a、C₂的比例，所得结果相当好地符合药典要求。数据见表1。

A₂菌株经生产上四吨发酵试验结果表明：A₂菌株发酵总单位不低于生产菌株＃72，用A₂菌株生产的庆大霉素比用＃72生产菌株生产的庆大霉素质量好。

庆大霉素是控制金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌和变形杆菌等感染的有效药物，也是我国出口的抗生素之一。本发明使用抗甲硫氨酸结构类似物（如乙硫氨酸等）的简便方法筛选到的菌株能生产出组份比例合适的庆大霉素，降低了药品的毒性，有益于人民身体健康;并能提高国产庆大霉素在国际市场上的竞争能力，增加国家外汇收入。

下面是本发明的实施例：

新鲜的生产上用的菌种斜面Micromonospora    purpurea＃72挖块接种到含培养液的三角瓶中，以230转/分、33℃振荡培养48小时，离心收集菌丝;以0.03M的磷酸缓冲液洗涤两次，菌丝