[其他]EBV病毒有关疾病的体外鉴别诊断方法

说明书

本发明涉及到EB病毒有关疾病的体外鉴别诊断方法，其中使用了一组诊断上相关的EB病毒抗原多肽，这些多肽通过DNA重组技术产生，并具有EB病毒有关蛋白的免疫学活性。

疱疹病毒是具套膜的十二面体衣壳，总直径为150毫微米。病毒基因组由一双链DNA组成，其分子量约为10⁸。人类疱疹病毒有单式Ⅰ型疱疹病毒（“发热性疱疹”）、单式Ⅱ型疱疹病毒（生殖器疱疹）、水痘带状疱疹病毒（水痘，带形疱疹）、细胞巨化病毒（先天性异常，如头小畸形）、及EB病毒（EBV）。

EBV导致的原发性疾病为传染性单核细胞增多症。它主要感染儿童和青年人。普通成人人口的90%以上受到EBV感染，并且EBV终身都留在外周B淋巴细胞中。该病毒在人的一生中都在腮腺中产生并通过口腔途径传播。在需要对白血病，或在器官移植情况下受体对移植物的排斥危象进行鉴别诊断时，明确而快速地鉴定传染性单核细胞增多症或急性EBV感染是特别重要的。在这些情况中，错误的诊断可能导致不正确的治疗，而这些不正确的治疗可能导致严重的甚至危及生命的后果。

血清学研究提示EBV还极可能与人类继发性肿瘤，即与非洲伯克特氏（Burkitts）淋巴瘤（BL）和鼻咽癌（NPC）形成有关。明确而迅速地鉴定这种继发性疾病也是很重要的，因为NPC的早期检测可使之对其进行早期处理，这将会显著降低NPC的死亡率。

在中国南方的某些地区及新加坡和马来西亚的华人中，NPC是最常见的人类肿瘤，发病率达每年每100，000人中有40人。在世界其它地区，如婆罗洲或突尼西亚发病率也很高。在大部分其它地区，发病率约为每年每100，000人中有0.2人，约占耳、鼻和喉（ENT）肿瘤的4%。在几乎所有的高发病率地区，病人的年龄分布显示在40至50岁左右有一清楚的单峰。

对用于EBV有关疾病诊断的EBV有关基因产物的选择

A.EBV感染初期：产生抗病毒衣壳抗原（VCA）、早期抗原（EA）及EB核心抗原（EBNA）的抗体。

在感染（单核细胞增多症）的急性期或初期，EBV感染B淋巴细胞。由于缺乏免疫反应，致使一些细胞进入溶解周期，并产生一系列病毒抗原，这些病毒抗原在细胞溶解时进入血流。为了抗这些抗原，宿主免疫系统将合成特异性抗体（表1）。

表Ⅰ

²XLP代表缺乏免疫力宿主的实例

¹通过GP240/200的免疫沉淀确定

（MA：膜抗原）

由于细胞因子阻碍EBV的表达，也许并非所有的B淋巴细胞都能受到完全的溶解性感染。在宿主的余生中，这些细胞潜在地携带着EBV基因组。

B.恢复期：抗EA抗体的消失及抗VCA和EBNA抗体的保留

由于肌体的免疫防御机制而从循环中去掉溶解感染的细胞，恢复期的抗体水平将开始下降。一段时间后，抗EA抗体消失。然而，如上所述，EBV仍在腮腺中产生。病毒颗粒及包括EB在内的细胞内病毒相关抗原将进入唾液并到达口咽部。病毒颗粒在这儿与B淋巴细胞结合并作为抗原存在于体内，从而仍维持着抗VCA抗体的效价。由于EA不能与淋巴细胞结合，它将被蛋白酶降解，因此不能被免疫系统用作诱导抗体的抗原。

被EBV潜在感染的循环淋巴细胞含有EBNA。在其生命周期之末，这些细胞将被分解，并将EBNA释放到血流中去。因此将保留有针对此抗原的抗体。

这样，由于腮腺产生EBV及潜在感染的B细胞释放EBNA，恢复期的血清中将含有低水平的抗VCA及抗EBNA的IgG抗体（见前面表Ⅰ）。

此外，极少数可能进入溶解周期的B淋巴细胞释放的EA，可能是抗原性很差的，故不能产生出本测试系统所能检测出的抗体水平。

C.患有继发性NPC个体体内的EBV相关抗体

抗原和抗体分类特异性检测方法的引入，尤其是对于抗EA及VCA两个抗原族的外周IgA抗体的确定，及至少对EA族进行再分类的第一次尝试（EA、D或R;G.Henle，W.Henle和G.Klein，”对EB病毒感染之细胞中早期抗原复合物两个不同组分的确定”，Int.J.Cancer，第8卷第272页（1971年）），显著地改善了检测方法的诊断及预防价值。

在NPC的高发病区，1%的成人中具有EBV衣壳抗原（VCA）的IgA抗体。