[其他]人类肿瘤相关抗原的单克隆抗体及其制备方法

说明书

本文是关于单克隆抗体，特别是小鼠的单克隆抗体，其对于人类癌细胞和组织的表面及胞浆中特异性抗原具有反应活性的能力。

人类免疫系统包括由淋巴细胞产生血清蛋白，即抗体，淋巴细胞能够与激发其生成的抗原决定族反应。因为免疫系统对一种具有许多抗原决定族的通常反应是产生各个决定族的抗体，所以天然产生的抗血清是异质性的或多克隆的，或者说抗血清是由各对一种特异决定族产生抗体的多种不同的细胞产生的。当在一个单一分子上出现一个以上的抗原决定族或特别是各引起一种抗体产生或免疫反应时，即可将抗原决定族看作是抗原决定部位。某单一抗体分子只对一个抗原决定族或抗原决定部位是特异的。

单克隆抗体是针对抗原分子上单一抗原决定族或决定部位的单一抗体，而决定族或抗原决定部位可在分子的几个部位重复。显然，欲在体外制取这种单克隆抗体，便需要由通常多克隆免疫反应诱生的大量抗体中筛选具有所要求之特征的单一抗体。体外制取单一的，高度特异性的单克隆抗体的基本技术是由Kohler，G.和Milsfein    C.建立的（Nature    256∶495-497，1975），即所谓杂交细胞瘤技术。该方法包括用抗原免疫小鼠和从动物体内收获抗体，并将这些抗体生成细胞与一种不产生抗体的骨髓瘤细胞株即浆细胞肿瘤细胞相融合，以产生杂交瘤细胞。这些杂交瘤细胞在体外具有骨髓瘤细胞系所有的存活和生长的能力。并具有与之融合的B淋巴细胞的大量生产抗体的能力。此产生单克隆抗体的杂交瘤细胞可于体外进行培养或作为肿瘤在宿主动物体内生长。因为每个抗体生成细胞产生唯一的一种抗体，所以杂交瘤的单克隆培养细胞可各产生一种单一的抗体，这种单一抗体可由体外培养杂交瘤细胞的培养基中获得，或可由腹腔内注射了这种细胞的小鼠腹水中获得，亦可由带杂交瘤之宿主动物的血清中得到。

虽然目前对产生杂交瘤和单克隆的一般方法已很清楚，但更应加深研究的还是如何分离和保留培养的杂交瘤细胞。因为由不同的细胞所产生的抗体只与同一分子上的不同抗原决定族反应，故可知针对一种主要抗原产生抗体的分离克隆在克隆与克隆之间是不同的。对所得到的抗体或含抗体的培养基、血清或腹水进行足够的试验是必要的。鉴于每个克隆对产生单克隆抗体造成的复杂性，而这些抗体又被应用于珍断和治疗，故有必要对各克隆的抗体进行定性。

欲得到所需要的单克隆抗体，就必须对那些将诱生某种特异抗体的抗原决定族作出鉴定和定位。或者由已完全融合的细胞建立几百个杂交瘤克隆，并针对正常或非正常组织以及在鉴别和限定那种产生具有需要的结合特异性的抗体的克隆中的不同抗原进行彻底筛选。根据其所产生的抗体，决定了细胞表面上与腺癌和鳞状细胞癌-这两种基本类型的癌之细胞表面标志上的结构差异。本文首要目的是产生并维持能与这一特殊的抗原决定族相结合的单克隆抗体的杂交瘤，以达到所需要的功能特异性。

已知单克隆抗体可被各种不同标记物所标记，以备检测、珍断性分析或治疗应用。在上述各种情况下，标记的单克隆抗体与抗原决定族部位的结合将成为一种特殊治疗剂的检定或传送到非正常细胞上抗原决定族的信号。本文的再一个目的是提供适当标记的特异性单克隆抗体，借以完成筛选和应用。

本发明特别应用于鉴别出现于腺瘤和鳞状细胞癌这两种特定疾病中的癌细胞。

对人类新生物组织之细胞表面和胞浆中特有抗原决定族特异的鼠之单克隆抗体已经制得。这种特有的抗原决定族被定名为“KC-4抗原”，它诱生只与新生物细胞结合而不与正常人体组织细胞结合的抗体。这种特殊的抗原在比较小的癌瘤细胞膜上表现有两种形式。第一种是较大形式的且只出现于胞浆中的，其分子量约为490，000道尔顿（范围480，000～510，000）。第二种是以高密度形式表达的，出现于癌细胞的胞浆内和胞膜上，用电泳方法测定并以其移动与已知分子量的商品蛋白质分子进行比较，其分子量约为438，000道尔顿（范围390，000～450，000之间）。（Towdin，et    al    proc.Natl.Acad.Sci.76∶4350-4354，1979    and    Laemmli，U.K.Nature，227∶680，1970），被称为“KC-4”的单克隆抗体通过标记，主要应用于癌症的诊断和治疗。

KC-4单克隆抗体特别适用于与人类患有任何器官原发腺癌和鳞状细胞癌时出现的癌细胞上或癌细胞内的抗原决定族相结合。