[其他]细菌多糖与免疫原蛋白共价结合物的制备方法

权利要求书

1、把有酸性基团的细菌荚膜多聚糖和免疫原蛋白通过含如下式的硫醚键双属间隔基结合制备多聚糖-蛋白质结合物的方法，A-E-S-B其中E是，R是H或-CH₃；A是Y(CH₂)_nNH-；这m是0到4；n是0到3；W是0或NH；Y是CH₂，O，S，NR′或CHCO₂H；这里R′是H或C₁-或C₂-的烷基；如果Y是CH₂，那么m和n二者不能都为O或S，n也是大

该方法包括下列步骤：

(1)有酸性基团的细菌荚膜多聚糖通过下列步骤加溶：

(i)用大的疏水阳离子取代多聚糖的酸性基中的氢，生成多聚糖的盐；然后

(ii)把多聚糖的盐溶在不含水，极性的质子惰性溶剂；

(2)用一种双功能试剂活化多聚糖；

(3)把这种活化的多聚糖与一个双一亲核试剂反应；

(4)把这已与一种双-亲核试剂反应了的活化的多聚糖与一种产生亲电子部位的试剂反应，从而与侧面亲电子部位生成一种多聚糖。

(5)使免疫蛋白单独地与一种产生硫醇基的试剂反应，与侧面硫醇基生成一种蛋白；然后

(6)通过超速离心法把含有侧硫醇基的蛋白中分子量低的硫醇除去；然后

(7)使具侧面亲电子部位的多聚糖与具侧面硫醇基的蛋白质反应，生成一种多聚糖-蛋白质结合体，它是通过共价的硫醚键使二者连接的，然后

(8)把混合液离心，以除去非共价联结的多聚糖和蛋白质。

2、根据权利要求1所述方法，其中所用具酸性基团的细菌荚膜多聚糖是从流感嗜血杆菌（Haemophilus  influonzae）b型多聚糖和肺炎球菌（Streptococcus  pnenmoniae）6B型，19F型和23F型多聚糖中选择的。

3、根据权利要求1所述方法，其中所用免疫原蛋白是脑膜炎双球菌B血清型外膜蛋白或麻仁球蛋白。

4、根据权利要求1所述方法，其中所用含酸性基团的细菌荚膜多聚糖是流感嗜血杆菌b型多聚糖，免疫原蛋白是脑膜炎双球菌B血清型外膜蛋白，它们是通过下式双属间隔基联结的：

5、根据权利要求1所述的方法，其中所用含酸性基团的细菌荚膜多聚糖是肺炎球菌6B型多聚糖，免疫原蛋白是一种脑膜炎双球菌B血清型外膜蛋白，它们是通过下式双属间隔基联结的：

6、根据权利要求1所述的方法，其中所用含酸性基团的细菌荚膜多聚糖是肺炎球菌19型多聚糖，免疫原蛋白是一种脑炎双球菌B血清型外膜蛋白，它们是通过下列双属间隔基联结的：

7、根据权利要求1所述方法，其中所用含酸性基团的细菌荚膜多聚糖是肺炎球菌23F型多聚糖，免疫原蛋白是一种脑膜炎双球菌B血清型外膜蛋白。它们是通过下式双层间隔基联结的：

8、一种加溶含有酸性基团的多阴离子多聚糖的方法，它包括：

（1）用大的疏水阳离子代替多聚糖中酸性基团的氢，以使多聚糖呈盐的形式，然后

（2）把以盐形式的多聚糖溶在不含水的极性的质子惰性溶剂。

9、一种根据权利要求8所述的方法，其中大的疏水阳离子是从含有三或四（C-C）烷基-铵，1-氮杂双环（2.2.2）辛烷和1，8-二氮杂双环（5.4.0）十一烷-7-烯的一组物质中选择的。

10、一种根据权利要求9所述的方法，其中的不含水的极性的质子惰性溶剂是从含有二甲基甲酰胺，二甲基亚砜，二甲基乙酰胺，甲酰胺和N，N′-二甲基咪唑啉酮的一组物质中选择的。

11、一种根据权利要求9所述的方法，其中大的疏水阳离子是四-正-丁胺;而不含水，极性的质子惰性溶剂是二甲基甲酰胺。

12、一种共价修饰多阴离子多聚糖的方法，它包括：

（1）把多聚糖加溶到不含水，极性的质子惰性溶剂之中;

（2）用双功能剂活化多聚糖，然后（3）把这个活化了的多聚糖与一个双-亲核试剂反应。