[其他]载体

说明书

本发明涉及一种新颖载体。更为特殊的是，发明所涉及的这种载体，其特征是至少含有一个启动基因区，此启动基因区出现在两个限制性内切酶断裂位置之间，而这两个位置分别地为两种不同的限制性内切酶所识别，但在断裂处却给出了两个相同的粘性末端。

这种启动基因是一种调节因子，它控制着由RNA所提供的遗传信息。其作用相当于是一个被RNA聚合酶所识别的位置，相当于是一个RNA聚合酶联接的位置，和相当于RNA合成的起始点，在蛋白质的合成中起非常重要的作用。

Lac启动基因、trp启动基因和β-内酰胺酶启动基因是人们所熟知的启动基因，它们在宿主大肠杆菌（Escherichiacoli）中的表型表达具有显著的功效。

在探索一种更有效的启动基因的研究中，一直在寻找这样的启动子并创造了杂种启动基因。例如，tac启动基因是由trp启动基因和Lac启动基因所组成。这是人们所熟知的杂种启动基因。

对于以酵母为宿主的启动基因来说，被提到的有PGK启动基因、ADH启动基因和phoE启动基因。

在探寻一种更有效的启动基因中，本发明人将研究引导到那些各包括有众多的系列启动基因的各种启动基因中去。

研究结果，他们发现，提供了这样一种载体，即其上有一个启动区，该区在两种限制性内切酶分别识别的切点之间，而又在两个切点上分别形成相同的粘性末端，那么，就能造出一系列的含有众多启动子的载体。目前，本发明已经完成了。

所以，本发明所涉及的是这样的载体，其特征是在两个限制性内切酶断裂位置之间至少出现一个启动基因区，而这两个位置分别地为两种不同的限制性内切酶所识别，而在断裂处却给出两个相同的粘性末端。

在附图中，

图1表示了pDR540和由此衍生得到的pTL1，后者对于多重tac启动基因来说是一种基本质粒;

图2表示了从pTL1构成多重tac启动基因的示意图;

图3表示了多重tac启动基因的构成示意图;

图4指出了pYN1的限制性内切酶断裂位置;

图5表示了pYN1的trp启动基因/操纵基因区的，以及围绕它们的DNA序列;

图6指出了pYN3的trp启动基因/操纵基因区内部和周围的限制性内切酶断裂位置;

图7指出了pYN4的限制性内切酶断裂位置;

图8指出了pYN6的限制性内切酶断裂位置;

图9表示了在pYN6的trp启动基因/操纵基因区中的DNA序列;

图10指出了pYN8、pYN9和pYN10的限制性内切酶断裂位置;

图11表示了pYN20的制备示意图，pYN20通过SalⅠ和XhoⅠ位置用以制备多重trp启动基因;

图12指出了从pYN20制备pYN21的示意图，pYN21起着多重trp启动基因的基本构成的作用;

图13指出了利用SalⅠ和XhoⅠ位置制备双重和三重trp启动基因的示意图。

按本发明所述，“具有相同的粘性末端”意味着在限制性内切酶断裂处出现单股断裂的那些部分具有相同的碱基序列。例如，BglⅡ判别序列是

5′-AGATCT-3′

3′-TCTAGA-5′

在断裂处，5′-GATC-3′成为粘性末端。另一方面，BamHⅠ识别序列是

5′-GGATCC-3′

3′-CCTAGG-5′

在断裂处，5′-GATC-3′成为粘性末端。其他限制性内切酶结合位置是SalⅠ与XhoⅠ和BamHⅠ与BclⅠ，这些结合位置也给出相同的粘性末端。

上述事实使两端可能发生连接（以下称为“连接”-Ligation）。此连接位置不可能再被前边所用的两种酶所断裂，这是因为这两个酶的识别位置之间有差别。利用这一特性，就可能制备多重启动基因。例如，BamHⅠ和BglⅡ粘性末端彼此连接时，就得到下面的序列。

5′-GGATCT-3′

3′-CCTAGA-5′

这样，在这一MboⅠ断裂位置上不再能够用BamHⅠ或BglⅡ断裂了。

SalⅠ和XhoⅠ粘性末端彼此连接时，就得到下面的序列。

5′-GTCGAG-3′

3′-CAGCTC-5′

这一序列是TaqⅠ断裂位置，所以不再能够被SalⅠ或XhoⅠ断裂了。

根据本发明，一个操纵基因和一个SD序列可以与两个不同的限制性内切酶的识别位置之间的启动基因一起存在。