[发明专利]转基因玉米事件LP035-2及其检测方法

说明书

本发明提供一种核酸序列，其包含选自序列SEQ ID NO:1‑7或其互补序列中的一种或多种，所述核酸序列来源于转基因玉米事件LP035‑2，包含所述事件的种子的代表性样本已以保藏编号CCTCC NO:P202322保藏。本发明的转基因玉米事件LP035‑2具有如下优点：免受由于鳞翅目害虫造成的经济损失；可耐受常用商业化除草剂草甘膦和草铵膦的玉米作物；不降低玉米产量；增强育种效率，能够用分子标记来追踪繁殖群体及其子代中的转基因插入片段。同时本发明提供的检测方法能够快速、准确、稳定的鉴定出来源于转基因玉米事件LP035‑2植物材料的存在。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，涉及转基因植物及其产品的检测方法，具体涉及对昆虫具有抗性且耐受草甘膦和草铵膦除草剂施用的转基因玉米事件LP035-2和用于检测转基因玉米LP035-2的核酸序列及方法。

背景技术

玉米(Zea mays L.)在世界上很多地区都是主要的粮食作物。生物技术已经应用于玉米以改善其农艺性状和品质。在玉米生产中昆虫抗性是一项重要的农艺性状，特别是对鳞翅目昆虫（例如小地老虎、草地贪夜蛾和甜菜夜蛾等）的抗性。玉米对鳞翅目昆虫的抗性可以通过转基因的方法使鳞翅目昆虫的抗性基因在玉米植物中表达而获得。另一个重要的农艺性状是除草剂耐受性，特别是耐受草甘膦和草铵膦除草剂。玉米对草甘膦和草铵膦除草剂的耐受性可以通过转基因的方法使草甘膦和草铵膦除草剂耐受型基因(如epsps、pat)在玉米植物中表达而获得。

除了功能基因(epsps基因和pat基因)本身，调控元件的选择及其顺序排布对于获得良好的转化事件是至关重要的，并且其技术效果是难以预料的。另外已知外源基因在植物体内的表达受其插入玉米染色体组位置的影响，可能是由于染色质结构(如异染色质)或转录调节元件(如增强子)接近整合位点。为此，通常需要筛选大量的事件才有可能鉴定出可以商业化的事件(即导入的目标基因得到最优表达的事件)。例如，在植物和其他生物体中已经观察到导入基因的表达量在事件间可能有很大差异；在表达的空间或时间模式上可能也存在差异，如在不同植物组织之间转基因的相对表达存在差异，这种差异表现在实际的表达模式可能与导入的基因构建体中的转录调节元件所预期的表达模式不一致。因此，通常需要产生成百上千个不同的事件并从这些事件中筛选出具有以商业化为目的所预期的转基因表达量和表达模式的单一事件。这样的转化事件具有优异的鳞翅目害虫和草甘膦、草铵膦除草剂抗性且不影响玉米产量，可采用常规育种方法通过杂交将转基因性状回交到其他遗传背景中。通过这种杂交方式产生的后代保持了原始转化体的转基因表达特征和性状表现。应用这种策略模式可以确保在许多品种中具有可靠的基因表达，具备稳定的鳞翅目害虫和草甘膦、草铵膦除草剂抗性，使这些品种免受主要鳞翅目害虫的为害，并具有广谱的杂草防控能力，同时能很好的适应当地的生长条件。

能够检测特定事件的存在以确定有性杂交的后代是否包含目的基因将是有益的。此外，检测特定事件的方法还将有助于遵守相关法规，例如来源于重组农作物的食物在投入市场前需要获得正式批准和进行标记。通过任何熟知的多核苷酸检测方法来检测转基因的存在都是可能的，例如聚合酶链式反应(PCR)或利用多核苷酸探针的DNA杂交。这些检测方法通常集中于常用的遗传元件，例如启动子、终止子、标记基因等。因此，除非与插入的转基因DNA相邻的染色体DNA（“侧翼DNA”）的序列是己知的，否则上述这种方法不能用于区别不同的事件，特别是那些用相同的DNA构建体产生的事件。所以，目前常利用跨越了插入的T-DNA和侧翼DNA的接合部位的一对引物通过PCR来鉴定转基因特定事件，具体地说是包含于侧翼序列的第一引物和包含插入序列的第二引物。

发明内容

本发明的目的是提供一种转基因玉米事件LP035-2以及用于检测玉米植物LP035-2事件的核酸序列及其检测方法，可以准确快速的鉴定生物样品中是否包含特定的转基因玉米事件LP035-2的DNA分子。