[发明专利]一种重组人源化Ⅲ型胶原蛋白及其制备方法和应用

说明书

本发明属于蛋白质工程和基因工程技术领域，具体涉及一种重组人源化Ⅲ型胶原蛋白及其制备方法和应用。本发明经筛选活性高、稳定性高、水溶性好的序列拼接成一段全新的人源化Ⅲ型胶原蛋白序列，其核苷酸序列经毕赤酵母密码子偏好性优化，并通过多位点整合质粒介导的重组菌构建方法，构建了一株高产重组人源化Ⅲ型胶原蛋白的工程酵母菌株，该菌株较优化前发酵上清液目标蛋白的浓度提高了2倍。上述技术方案制备得到的重组人源化Ⅲ型胶原蛋白与市售的胶原蛋白产品相比，其抗氧化及促细胞迁移等生物活性效果更好，因此具有良好的实际应用之价值。

技术领域

本发明属于蛋白质工程和基因工程技术领域，具体涉及一种重组人源化Ⅲ型胶原蛋白及其制备方法和应用。

背景技术

公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

胶原蛋白是哺乳动物体内含量最丰富的蛋白，占体内蛋白质含量的25%～35%，是人体细胞骨架和细胞质基质的主要组成部分。Ⅲ型胶原蛋白是一种成纤维胶原蛋白，它由3条α1(Ⅲ)肽链组成。III型胶原蛋白是血管、子宫和肠等中空器官的主要结构蛋白，它还经常与Ⅰ型胶原蛋白共生，广泛存在于皮肤、筋膜、肌腱等组织中。III型胶原蛋白为许多器官提供抗张强度和结构完整性，并参与调控细胞的黏附、增殖、迁移、分化等基本活动。III型胶原蛋白在伤口愈合、组织修复等过程中发挥关键作用，它被作为一种主要功能成分，被广泛应用于皮肤修复敷料中。

III型胶原蛋白因为与其他类型胶原蛋白共生，含量较低，因此，从动物组织提取III胶原蛋白存在难度大、纯度低、成本高等严峻问题。生物合成法利用转基因技术和基因重组技术，可以在动物、植物和微生物表达体系获得重组人胶原蛋白，解决了传统提取方法存在的病毒隐患等缺点，同时也改善了胶原蛋白的亲水性、免疫排异性等。动物、植物等表达体系成本高、周期长，难以满足产业化需求，相比之下，微生物发酵生产重组胶原蛋白成本低、周期短、培养较容易，更易于商业化生产。但是细菌表达系统容易造成热原残余，致使表达产物不纯，难以应用于临床，而且目的蛋白通常以包涵体形式表达，产物纯化过程复杂，另外原核表达系统的翻译后加工修饰体系不完善，表达产物的生物活性较低等缺点影响产品的品质。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种重组人源化Ⅲ型胶原蛋白及其制备方法和应用。经试验证明，本发明生产的重组人源化Ⅲ型胶原蛋白其具有更佳的抗氧化及促细胞迁移等生物活性，且非常适合进行工业化大规模生产。基于上述研究成果，从而完成本发明。

为了实现上述技术目的，本发明提供的技术方案如下：

本发明的第一个方面，提供一种重组人源化Ⅲ型胶原蛋白，所述重组人源化Ⅲ型胶原蛋白：

a1）如SEQ ID NO.1所示；或，

a2）与SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列具有90％以上的序列同源性。

本发明的第二个方面，提供一种核酸分子，所述核酸分子能够编码上述重组人源化Ⅲ型胶原蛋白。

本发明的第三个方面，提供一种重组表达载体，所述重组表达载体包含第二方面所述的核酸分子。

本发明的第四个方面，提供一种宿主细胞，所述宿主细胞含有本发明第三方面所述的重组表达载体或染色体整合有本发明第二方面所述的核酸分子或者能够表达本发明第一方面所述重组人源化Ⅲ型胶原蛋白。

本发明的第五个方面，提供一种制备本发明第一方面所述重组人源化Ⅲ型胶原蛋白的方法，包括：培养本发明第四方面所述的宿主细胞，从而表达出所述重组人源化Ⅲ型胶原蛋白；和分离纯化所述重组人源化Ⅲ型胶原蛋白。

本发明的第六个方面，提供上述重组人源化Ⅲ型胶原蛋白在制备食品、药品或日化用品中的应用。

本发明的第七个方面，提供一种化妆品，所述化妆品至少包含上述第一方面所述的重组人源化Ⅲ型胶原蛋白。