[发明专利]骨髓有核细胞在制备治疗肝硬化或脂肪肝产品中的应用

说明书

本发明公开了一种骨髓有核细胞在制备治疗肝硬化或脂肪肝产品中的应用，本发明通过将骨髓有核细胞注射到脂肪肝的肝脏器官中，在肝脏微环境中骨髓有核细胞中的干细胞能够转化成有功能的肝细胞，并能够产生某些细胞因子促进损伤肝细胞的修复，实现肝损伤的修复并改善肝脏环境，逆转肝纤维化，进而促进肝功能的恢复，实现肝硬化的治疗。

技术领域

本发明涉及生物工程技术领域，具体涉及一种骨髓有核细胞在制备治疗肝硬化或脂肪肝产品中的应用。

背景技术

脂肪肝是指由于各种原因引起的肝细胞内脂肪堆积过多的病变，是一种常见的肝脏病理改变，而非一种独立的疾病。正常人肝组织中含有少量的脂肪，如甘油三酯、磷脂、糖脂和胆固醇等，其重量约为肝重量的3％～5％，如果肝内脂肪蓄积太多，超过肝重量的5％或在组织学上肝细胞50％以上有脂肪变性时，就可称为脂肪肝。其临床表现轻者无症状，重者病情凶猛。一般而言，脂肪肝属可逆性疾病，早期诊断并及时治疗常可恢复正常。

肝硬化是临床常见的慢性进行性肝病，由一种或多种病因长期或反复作用形成的弥漫性肝损害。大多数为肝炎后肝硬化，少部分为酒精性肝硬化和血吸虫性肝硬化。病理组织学上有广泛的肝细胞坏死、残存肝细胞结节性再生、结缔组织增生与纤维隔形成，导致肝小叶结构破坏和假小叶形成，肝脏逐渐变形、变硬而发展为肝硬化。早期由于肝脏代偿功能较强可无明显症状，后期则以肝功能损害和门脉高压为主要表现，并有多系统受累，晚期常出现上消化道出血、肝性脑病、继发感染、脾功能亢进、腹水、癌变等并发症。

虽然肝移植是晚期肝硬化的有效治疗方法，但预后仍很差；而且肝移植存在供体缺乏、手术损伤、免疫排斥及费用昂贵等问题，因此提供一种有效治疗肝硬化的生物制剂尤为关键。

发明内容

本发明的目的在于提供一种骨髓有核细胞在制备治疗肝硬化或脂肪肝产品中的应用，本发明通过将骨髓有核细胞注射到脂肪肝的肝脏器官中，能够实现肝损伤的修复并改善肝脏环境，逆转肝纤维化，进而促进肝功能的恢复，实现肝硬化的治疗。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

本发明第一方面提供了一种骨髓有核细胞在制备治疗肝硬化或脂肪肝产品中的应用。

优选地，所述骨髓有核细胞为自体骨髓有核细胞。

优选地，所述产品为含有骨髓有核细胞的生物制剂。

优选地，所述生物制剂中骨髓有核细胞的含量为(1～4)×10⁷cfu/ml。

优选地，所述骨髓有核细胞中巨大未成熟细胞占比为0.6％～4％。

本发明第二方面提供了一种用于治疗肝硬化或脂肪肝的生物制剂的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：

(a)将肝素添加到生理盐水中，配制得到肝素生理盐水；

(b)采用预充肝素生理盐水的注射器采集骨髓，得到肝素抗凝的骨髓液；

(c)将肝素抗凝的骨髓液进行密度梯度离心形成下部红细胞层、中部白膜层和上部血浆层，收集中部白膜层即得所述生物制剂。

优选地，所述步骤(a)中，肝素生理盐水的肝素浓度为4～6mg/ml。

优选地，所述步骤(b)中，密度梯度离心转速为2500～3500r/min，离心时间为6～15min。

优选地，所述步骤(b)中，肝素生理盐水与骨髓的体积比为1∶(3～5)。

本发明第三方面提供了一种上述制备方法制得的用于治疗肝硬化或脂肪肝的生物制剂，所述生物制剂中骨髓有核细胞的含量为(1～4)×10⁷cfu/ml；所述骨髓有何细胞中巨大未成熟细胞占比为0.6％～4％。