[发明专利]一种坤泰胶囊中阿胶及其异源性成分的检测方法

说明书

本发明提供一种坤泰胶囊中阿胶及其异源性成分的检测方法，所述检测方法包括如下步骤：(1)将坤泰胶囊内容物制备成供试品溶液；(2)将所述供试品溶液进行超高效液相色谱‑质谱检测，得到特征谱图，根据所述特征谱图测定阿胶特征多肽的含量，并判断异源性成分；所述阿胶特征多肽包括驴源多肽A1、驴源多肽A2；所述异源性成分包括龟甲胶、鹿角胶、黄明胶、新阿胶、牛皮特征肽A、马源寡肽A。本发明在鉴别坤泰胶囊中的阿胶的同时，可以测定坤泰胶囊中阿胶特征多肽含量和检查牛皮和马皮等5种异源成分掺假，为坤泰胶囊的质量控制提供快速简便、灵敏度高、专属性强的新方法，提升坤泰胶囊的品质，保障该制剂的质量安全。

技术领域

本发明属于分析化学技术领域，具体涉及一种坤泰胶囊中阿胶及其异源性成分的检测方法。

背景技术

坤泰胶囊处方源于医圣张仲景《伤寒论》中的经典名方“黄连阿胶汤”，由黄连、阿胶、熟地黄等制备而成的纯中药制剂，为贵阳新天药业股份有限公司的全国独家品种和国家中药保护品种，收载于《中华人民共和国药典》2020年版一部，具有滋阴清热、安神除烦的功效，阿胶为该处方中的主药之一，在坤泰胶囊中占比约为20％。

随着人们保健意识的增强，以养血滋补功效著称的阿胶越发受到关注。但是，由于驴并不是主要的家畜，对阿胶需求的增加必然会导致原料的短缺。若不进行杂皮胶(马皮、骡皮、牛皮、猪皮、羊皮、废旧皮革等)的检测控制，则将导致含有阿胶原料的所有产品存在潜在质量风险。胶类样品的主要成分为胶原蛋白，不同物种的胶原蛋白的氨基酸序列存在差异，因此使用蛋白酶对胶类样品进行酶解可得到每种胶类样品特有的氨基酸序列肽段(特征肽)。检测阿胶及其有关制剂中杂皮胶的方法已有不少报道，但这些方法往往只针对其中1-2种胶类掺入。

有报道采用超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS法)检测阿胶、黄明胶和鹿角胶中猪皮特征肽。方法:采用胰蛋白酶进行酶解处理；使用C18色谱柱，柱温30℃，以0.1％甲酸水溶液(A)-0.1％甲酸乙腈溶液(B)为流动相,梯度洗脱，流速0.4mL·min^-1，进样量为2μL，电喷雾离子源(ESI+),采用多重反应监测模式(MRM)，正离子模式,对猪皮特征肽目标离子m/z 406.5(双电荷)→657.3和m/z 406.5(双电荷)→556.3进行检测。检测限为11mg·kg^-1,阿胶样品中猪皮杂质残留限值为76.7mg·kg^-1。(谢强胜.等.“基于酶解法采用超高效液相色谱-串联质谱法检测阿胶、黄明胶、鹿角胶中猪皮特征肽”药物分析杂志，2022,42(01):166-171)。

还有报道建立超高效液相色谱-三重四级杆质谱法(UPLC-MS/MS法)测定驴胶补血颗粒中牛皮源、猪皮源成分。方法用胰蛋白酶对驴胶补血颗粒中胶类成分进行酶解,采用UPLC-MS/MS法，以牛皮源特征肽m/z 641.3(双电荷)→726.2、m/z 641.3(双电荷)→783.3及猪皮源特征肽m/z 774.5(双电荷)→977.8、m/z774.5(双电荷)→1034.6作为检测离子对,离子化模式为ESI+，进行多反应监测。(郑文燕.等，“UPLC-MS/MS法检测驴胶补血颗粒中牛皮源及猪皮源成分”沈阳药科大学学报，2021,38(11):1152-1158)。

因此，建立一种检测方法，可以同时测定坤泰胶囊中阿胶特征多肽的含量并检测猪皮、牛皮和马皮等5种异源成分是否存在掺假情况是本领域的研究重点。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种坤泰胶囊中阿胶及其异源性成分的检测方法，可以同时鉴别坤泰胶囊中的阿胶、测定坤泰胶囊中阿胶特征多肽的含量和检测猪皮、牛皮和马皮等5种异源成分。

为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：

第一方面，本发明提供一种坤泰胶囊中阿胶及其异源性成分的检测方法，所述检测方法包括如下步骤：

(1)将坤泰胶囊内容物制备成供试品溶液；