[发明专利]一种制备金黄色葡萄球菌肺炎小鼠模型的方法及模型评价

权利要求书

1.一种制备金黄色葡萄球菌肺炎小鼠模型的方法，其特征在于：所述步骤如下：

步骤一：金黄色葡萄球菌的体外标记；

步骤二：金黄色葡萄球菌肺炎小鼠模型的建立。

2.根据权利要求1所述一种制备金黄色葡萄球菌肺炎小鼠模型的方法，其特征在于：所述金黄色葡萄球菌的体外标记包括以下步骤：

a：菌株及细菌培养；

b：近红外荧光染料及细菌标记。

3.根据权利要求2所述一种制备金黄色葡萄球菌肺炎小鼠模型的方法，其特征在于：所述菌株及细菌培养步骤包括如下：

S1：活化，将-80℃--90℃冰箱保存的金黄色葡萄球菌的甘油菌种化冻后，使用接种环接种于琼脂培养皿中，37℃-45℃培养过夜；

S2：预培养，将步骤S1得到的菌液以1:100(v/v)接种到30ml新鲜的NB液体培养基中，在37℃-45℃，250rpm下培养6h-10h，直到达到OD600为0.8；

S3：正式培养：将S2得到的菌液以1:100(v/v)接种到30ml新鲜的NB液体培养基中，在37℃-45℃，250rpm下培养4h，直到达到OD600为0.6；

S4：菌液OD调整，收集S3得到的1mL菌液至无菌EP管中，4000rpm离心10min集菌，弃培养基上清液，用PBS清洗3-4次，转速为4000rpm，时间10-15分钟，温度25℃-30℃，后用PBS调整菌液浓度约为2×10⁸CFU/ml细菌溶液。

4.根据权利要求2所述一种制备金黄色葡萄球菌肺炎小鼠模型的方法，其特征在于：所述近红外荧光染料为氨基水溶性量子点，激发及发射波长为650±20nm。

5.根据权利要求2所述一种制备金黄色葡萄球菌肺炎小鼠模型的方法，其特征在于：所述细菌标记方法为向浓度为2×108CFU/ml细菌溶液中加入2μg/ml量子点染料，将菌液冰浴10-15分钟，42℃水浴90秒，然后立即冰浴2分钟，再置于37℃-45℃恒温恒湿培养箱中培养60分钟，培养结束后，4000rpm离心6分钟，弃去上清液，用PBS清洗3-5次转速为4000rpm，时间10-15分钟，温度25℃-30℃，再用1mlPBS重新悬浮。

6.根据权利要求1所述一种制备金黄色葡萄球菌肺炎小鼠模型的方法，其特征在于：所述金黄色葡萄球菌肺炎小鼠模型的实验动物为BALB/c雄性小鼠30只，体重20-22g，实验小鼠喂养在海军特色医学中心动物房，饲养环境室内相对湿度为50％-60％，温度控制在18-22℃；常规饲料喂养，自由饮用水，按时通风冲刷粪便，保持环境安静，适应性喂养1-2周后开始实验。

7.根据权利要求1所述一种制备金黄色葡萄球菌肺炎小鼠模型的方法，其特征在于：所述金黄色葡萄球菌肺炎小鼠模型的建立还包括对实验动物进行接种细菌，采用暴露气管，小鼠气管内定量气溶胶雾化装置经口气管雾化给菌的方式。

8.根据权利要求7所述一种制备金黄色葡萄球菌肺炎小鼠模型的方法，其特征在于：所述接种细菌方法为：

a：采用戊巴比妥钠麻醉小鼠，将小鼠呈仰卧位固定于操作台上，切开颈部皮肤，游离气管，用皮筋挂住小鼠门牙，用镊子轻轻拉出小鼠舌头；

b：待拉出小鼠舌头之后，左手持喉镜，自小鼠上唇齿伸入口腔，伸至鼠会厌缘处调整角度直至可清晰看到声门裂为宜；

c：右手持预先定量装入近红外荧光标记金黄色葡萄球菌的小鼠气管内定量气溶胶雾化装置，将气溶胶雾化喷射头插入气管15-20mm，提拉气管，确定针头是否准确插入气管，随后迅速推注50μl金黄色葡萄球菌菌液；

d：推注完毕后，缝合伤口，空白组不做处理，盐水对照组推入同等量的无菌生理盐水。

9.根据权利要求1所述一种制备金黄色葡萄球菌肺炎小鼠模型的模型评价，其特征在于：将造模好的小鼠放入小动物活体成像仪中，通过近红外成像系统活体观察小鼠肺部成像情况，观察到小鼠肺部有明显均匀的近红外荧光图像即为造模成功。