[发明专利]一种培养免疫细胞的方法

说明书

本发明涉及免疫细胞培养技术领域，且公开了一种培养免疫细胞的方法，包括以下步骤：准备新鲜外周血150ml，培养瓶、灭活后的血浆、复合培养基、离心管、离心机、培养箱；将步骤1)中的新鲜外周血放入离心管内，再将离心管放入离心机内进行离心，离心完成后对外周血中的单个核细胞进行采集得到单个核细胞。该培养免疫细胞的方法，通过将离心机对外周血中的单个核细胞进行提取分离，将提取出的单个核细胞放入培养瓶内，再将含有基础培养基、抗体因子和辅助培养因子的复合培养基放入培养瓶内，在将培养瓶放入培养箱内，对培养箱内的温度、二氧化碳浓度和饱和湿度进行精确调控，使培养箱内的环境始终保持在最适合免疫细胞生存的条件。

技术领域

本发明涉及免疫细胞培养技术领域，具体为一种培养免疫细胞的方法。

背景技术

免疫细胞（immune cell）俗称白细胞，包括淋巴细胞和各种吞噬细胞等，也特指能识别抗原、产生特异性免疫应答的淋巴细胞等。淋巴细胞是免疫系统的基本成分，在体内分布很广泛，主要是T淋巴细胞、B淋巴细胞受抗原刺激而被活化（activation），分裂增殖、发生特异性免疫应答。除T淋巴细胞和B淋巴细胞外，还有K淋巴细胞和NK淋巴细胞，共四种类型。T淋巴细胞是一个多功能的细胞群；除淋巴细胞外，参与免疫应答的细胞还有浆细胞、粒细胞、肥大细胞、抗原呈递细胞及单核吞噬细胞系统的细胞，免疫细胞可以识别和清除已经死亡的细胞和组织，以及清除体内的废物和代谢产物。此外，免疫细胞还能够产生抗体和细胞因子，调节和协调整个免疫系统的活动，帮助人体应对各种不同的病原体和环境压力。

现有技术中对免疫细胞进行培养时需要对培养液体进行人工混合，并在操作过程中需要多次进行离心处理，操作繁琐，且现有技术中对免疫细胞培养时一次性培养的细胞较少，导致对免疫细胞的培养效率较为低下，因此，提出一种培养免疫细胞的方法来解决上述问题。

发明内容

（一）解决的技术问题

针对现有技术的不足，本发明提供了一种培养免疫细胞的方法，具备操作简单、培养效率高的优点，解决了现有技术中对免疫细胞进行培养时需要对培养液体进行人工混合，并在操作过程中需要多次进行离心处理，操作繁琐，且现有技术中对免疫细胞培养时一次性培养的细胞较少，导致对免疫细胞的培养效率较为低下的问题。

（二）技术方案

为实现上述操作简单、培养效率高的目的，本发明提供如下技术方案：一种培养免疫细胞的方法，包括以下步骤：

1）准备新鲜外周血150ml，培养瓶、灭活后的血浆、复合培养基、离心管、离心机、培养箱；

2）将步骤1)中的新鲜外周血放入离心管内，再将离心管放入离心机内进行离心，离心完成后对外周血中的单个核细胞进行采集得到单个核细胞；

3）将复合培养基注入培养瓶内；

4）将步骤2)中制得的单个核细胞放入含有复合培养基的培养瓶内；

5）将培养瓶放入培养箱内。

进一步，所述步骤2)中含有新鲜外周血的离心管在放入离心机后，将离心机的转速保持在2500转每分钟，离心时间为十分钟到二十五分钟。

进一步，所述步骤2)中制得的单个核细胞需放入生理盐水中清洗2-3次。

进一步，所述步骤5)中，培养箱内的温度需保持在36摄氏度，培养箱内二氧化碳的浓度需保持在百分之五，培养箱内的饱和湿度保持在百分之六。

进一步，所述步骤3)中，复合培养基的体积与培养瓶的容积之比为0.5-0.55。

进一步，所述步骤5)中，培养瓶需在培养箱内放置3-6天。

进一步，所述复合培养基中含有基础培养基、抗体因子和辅助培养因子。

进一步，所述步骤5)中，在培养到第四天时，需要在培养瓶加入60ml的复合配培养基和5ml灭活后的血浆。