[发明专利]一种抗CK6重组兔单克隆抗体及其应用

说明书

本发明涉及一种抗CK6重组兔单克隆抗体及其应用，所述抗CK6重组兔单克隆抗体包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No.4所示；所述轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No.5所示。相比市售的抗CK6单克隆抗体，本发明提供的抗CK6重组兔单克隆抗体，与CK6蛋白具有更高亲和力，可高特异性和高灵敏度地识别和检测肿瘤细胞或免疫细胞上CK6蛋白的表达，可应用于免疫组织化学(IHC)、间接ELISA、免疫印记(Western blotting)、抗体芯片制备、流式细胞术等检测与筛查领域，有利于获得更准确的检测和评估结果，并降低检测成本和背景信号的干扰。

技术领域

本发明属于免疫化学技术领域，尤其涉及一种抗CK6重组兔单克隆抗体及其应用，特别是在免疫组织化学检测方面的应用。

背景技术

细胞角蛋白6（Cytokeratin 6, CK6），分子量约为56 kDa，通常与细胞角蛋白16或细胞角蛋白17（Cytokeratin 1617, CK16CK17）成对出现，属于II型碱性细胞角蛋白。在正常组织中，CK6可标记鳞状上皮和导管上皮的基底细胞以及部分鳞状上皮发生层细胞、肌上皮细胞和间皮细胞，腺上皮细胞不表达。因此，可用于鳞癌和腺癌、间皮瘤和腺癌的鉴别诊断。亦可用于导管上皮良、恶性增生的鉴别诊断。CK6通常与CK5密切相关，它们具有相似的组织分布，并且在许多非角化复层鳞状上皮中以不同比例呈现，如舌粘膜、气管基底上皮、表皮基底细胞、毛囊、皮肤皮脂腺和汗腺、乳腺腔细胞、前列腺基底细胞、尿道上皮细胞、阴道和宫颈内膜粘膜等。因此筛选一株高灵敏度、强特异性的抗CK6抗体，对识别和检测肿瘤细胞或免疫细胞上CK6蛋白的表达具有非常重要的作用。

发明内容

（一）要解决的技术问题

鉴于现有技术的上述缺点、不足，本发明提供一种抗CK6重组兔单克隆抗体及其应用，所述抗CK6重组兔单克隆抗体应用广泛，并能准确识别CK6的表达，经过多种不同组织的免疫组织化学检测发现，该抗体可以很好的检测到肿瘤细胞或免疫细胞上CK6蛋白的表达，可应用于免疫组织化学(IHC)、间接ELISA、免疫印记(Western blotting)、抗体芯片制备、流式细胞术等检测与筛查领域。本发明还涉及编码该抗CK6重组兔单克隆抗体的核苷酸序列、重组质粒或表达载体、制备方法及抗CK6重组兔单克隆抗体在CK6蛋白检测方法或装置中的应用等。

（二）技术方案

为了达到上述目的，本发明采用的主要技术方案包括：

第一方面，本发明提供一种抗CK6重组兔单克隆抗体，其包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No.4所示；所述轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No.5所示。

抗CK6重组兔单克隆抗体（CK6兔源抗体）可用于免疫组织化学检测，能高特异性和高灵敏度地识别和检测肿瘤细胞或免疫细胞上CK6蛋白的表达。

所述抗CK6单克隆抗体由哺乳动物细胞重组表达获得。具体地，本发明提供的抗CK6重组兔单克隆抗体是通过兔杂交瘤融合筛选，293细胞真核表达产生。在制备所述抗CK6单克隆抗体时，免疫兔子（新西兰大白兔）用的抗原为合成多肽，所述合成多肽的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，其由人工化学合成得到。免疫兔子后，经细胞融合、克隆筛选，获得可高效分泌单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞系，并使用分子克隆技术获得编码所述抗体的重链氨基酸序列和轻链氨基酸序列的核苷酸序列，将核苷酸序列构建在真核表达载体上，通过转染试剂转染到293细胞系，收集细胞上清，经Protein A柱亲和层析纯化细胞上清，获得兔单克隆抗体。免疫组织化学检测显示该抗体能特异性识别CK6蛋白。

所述抗CK6单克隆抗体能够识别重组CK6抗原蛋白和肿瘤细胞和免疫细胞上的CK6分子；所述抗CK6单克隆抗体还可以应用在免疫组化病理诊断剂中。

第二方面，本发明提供编码基因，用于编码上述抗CK6重组兔单克隆抗体。