[发明专利]一种核桃粕抗结肠癌肽及其应用

说明书

本发明公开了一种核桃粕抗结肠癌肽及其应用，属于食品深加工技术领域。所述抗结肠癌细胞增殖肽自C端至N端的氨基酸序列为：Val‑Ser‑Leu‑Pro，简称VSLP。本发明从核桃粕中酶解制备了抗结肠癌细胞增殖肽，采用超滤进行纯化，经nanao‑LC‑MS/MS鉴定多肽序列，并利用网络药理学、生物信息学和分子对接技术筛选抗结肠癌细胞增殖肽，筛选出的抗结肠癌肽VSLP与结肠癌关键靶点CASP‑3和MMP‑9之间主要通过氢键和疏水相互作用。人工合成并验证了所述肽抗结肠癌细胞增殖活性，多肽VSLP可以有效抑制人结肠癌HCT116、HT‑29、SW480和SW620细胞系增殖。

技术领域

本发明涉及一种核桃粕抗结肠癌肽及其应用，属于食品深加工技术领域。

背景技术

结肠癌(CRC)是发生在结肠的常见恶性肿瘤，是全球第四大致命的癌症。在新的CRC诊断中，20％的患者出现转移性疾病，另外25％出现局部疾病的患者会发生转移，这给癌症的治疗带来了极大的挑战。目前大部分的抗癌药物对肾脏、心脏和性腺等器官有不良反应，且长期服用后会出现多重耐药性、药物生物利用度低、细胞特异性差等诸多问题，导致癌症复发的概率增大。因此，发现新的、安全的、天然的抗癌肽在食品和医药行业具有重要意义。

核桃(Juglans regia L.)是全世界消费的四大坚果之一。核桃含有丰富的蛋白质和必需氨基酸，是高质量的植物蛋白来源。除了核桃蛋白的高营养价值外，核桃衍生的肽作为一种有前景的功能成分，显示出很高的生物活性，包括抗氧化、抗高血压、抗炎和抗癌活性。然而，核桃肽的抗CRC活性及其作用机制仍然知之甚少。因此，肽的特征及其抗癌活性对于了解核桃蛋白及其释放的生物活性肽的健康益处至关重要。

由于技术复杂、效率低和成本高等问题，使用分子、细胞和生理检测方法发现和鉴定抗癌肽仍然具有挑战性。

发明内容

为解决以上问题，本申请以核桃粕为原料，通过酶解法制备活性多肽，并采用超滤法进行纯化，nano-LC-MS/MS鉴定多肽序列，结合网络药理学、生物信息学和分子对接方法虚拟筛选潜在抗癌核桃粕多肽，筛选出一条具有抗结肠癌的核桃粕蛋白肽，且其他功能性肽段也可参照此方法进行筛选。

网络药理学是一门新兴学科，它结合了系统生物学、生物信息学和网络科学等领域，通过分析化合物与治疗目标的分子关系来揭示化合物的系统药理机制，从而指导药物开发。众多研究表明，体外/体内实验与网络药理学方法相结合，可以有效地探索和评估来自蛋白质的潜在生物活性肽的活性及其药理机制。目前，应用网络药理学和虚拟筛选的方法与传统的分离鉴定方法从核桃粕中寻找发现具有潜在抗癌活性的多肽，尚未见相关文献报道。

本发明的第一个目的是提供一种具有抗结肠癌功能的核桃粕蛋白肽，其氨基酸序列为Val-Ser-Leu-Pro(VSLP)，分子量为414.2Da。

本发明的第二个目的是提供含有所述核桃粕蛋白肽的产品，所述的产品为食品、保健品或药品。

在一种实施方式中，所述药品为抗结肠癌药品，所述药品含有≥214.9μM(89.07μg/mL)的核桃粕蛋白肽。

在一种实施方式中，所述保健品用于辅助保护胃肠粘膜。

在一种实施方式中，所述食品为普通食品、功能性食品或特殊医学用途食品。

在一种实施方式中，所述核桃粕蛋白肽单独使用，或作为添加剂用于普通食品、保健品、功能性食品、特殊医学用途食品以及药品中。

本发明还提供了从核桃粕中获得的抗结肠癌肽的方法，所述方法是结合传统分离方法和虚拟筛选的方法所获得。

在一种实施方式中，本发明涉及的传统制备分离技术包括蛋白酶酶解、超滤分离、nano-LC-MS/MS鉴定。

在一种实施方式中，本发明涉及的虚拟筛选的方法包括网络药理学分析、生物信息学分析和分子对接。