[发明专利]一种蒽降解菌株及其分离筛选方法

说明书

本发明一种蒽降解菌株及其分离筛选方法，属于微生物技术领域。蒽降解菌株Pseudomonas stutzeri R4004‑2，CGMCC No.27049。其在肉汤平板培养基上菌落直径在0.25cm左右，呈光滑半透明状，随着培养时间的增长，菌落表面出现皱褶，边缘不平整；革兰氏染色结果为阴性；固氮酶活性为2.16 nmol Csubgt;2/subgt;Hsubgt;4/subgt;/mg蛋白·h；其在肉汤培养基中培养12h时OD600最高，其浓度为10supgt;9/supgt;cfu/mL。所述分离筛选方法，包括：采集土样、土样驯化、降解菌的分离和降解菌的筛选。本发明具有以下优点：筛选的降解菌在肉汤培养基中生长更好，且在降解的第3天降解活动最为活跃，第5天完成降解，最终的降解效率约为82.3%；降解菌可在蒽污染的土壤中定殖，具有实际应用的潜质。

技术领域

本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种蒽降解菌株及其分离筛选方法。

背景技术

蒽作为其具有代表性的有毒的污染物，结构稳定，难以降解，其结构单元同时也存在于致癌性苯并[a]芘(Ba[a]P)和苯并[a]蒽(Ba[a]A)中，故也经常被当作降解PAHs的模型化合物，同时蒽也是检测PAHs污染的指示物。传统PAHs污染土壤修复技术如淋洗法、热处理法等，成本高且易造成二次污染，应用有一定的局限性。生物修复法降解效率高、无二次污染、可原位处理，是未来大范围污染处理的理想方式。现阶段对PAHs污染的生物修复的研究主要涉及降解功能菌株的筛选及降解特性的分析、降解功能基因挖掘、降解途径及机理解析，降解过程代谢中间产物分析，以及人工强化的生物降解调控技术等方面，其中通过人工驯化从环境中分离出修复性能优异的微生物，强化降解污染物菌株的定殖技术和调控技术是生物修复的主流。目前已报道的降解菌大约有200多种，以细菌为主，例如蓝细菌门的蓝细菌属、拟杆菌门的黄杆菌属、厚壁菌门的芽孢杆菌属中均有PAHs降解菌分布。

目前生物修复法在PAHs污染土壤修复的实际应用上较少，尤其是对蒽污染土壤生物降解的成功案例鲜有报道，主要是由于实验室中筛选或改造的高效降解菌降解效率受环境条件限制严重，仅在其较适宜的环境条件下有较高的PAHs降解速率，施入土壤后受到环境温度、湿度、土著微生物竞争等影响，难以发挥出应有的降解效率，甚至难以在污染土壤中定殖。

发明内容

本发明旨在从土壤中分离筛选可以高效降解蒽并可耐受多种PAHs的降解菌，评价其降解效果和在污染土中的定殖能力，并通过多组学结合分析的方式研究降解菌的蒽降解通路，初步解析其降解特性，为PAHs污染土壤的生物修复法提供可利用的微生物资源以及理论基础。

本发明的第一个目的在于公开了一种蒽降解菌株。

本发明的第二个目的在于公开了一种蒽降解菌株的分离筛选方法。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

一种蒽降解菌株 Pseudomonas stutzeriR4004-2，CGMCC No.27049。

上述技术方案所述的蒽降解菌株 Pseudomonas stutzeriR4004-2，其中：所述蒽降解菌株 Pseudomonas stutzeriR4004-2在肉汤平板培养基上菌落直径在0.25cm左右，呈光滑半透明状，随着培养时间的增长，菌落表面出现皱褶，边缘不平整；革兰氏染色结果为阴性。