[发明专利]检测游离B细胞刺激因子的方法在审
| 申请号： | 202310602912.5 | 申请日： | 2023-05-25 |
| 公开（公告）号： | CN116333033A | 公开（公告）日： | 2023-06-27 |
| 发明（设计）人： | 王变珍;王敏瑞;王琪;武丽华 | 申请（专利权）人： | 军科正源（北京）药物研究有限责任公司 |
| 主分类号： | C07K1/22 | 分类号： | C07K1/22;G01N33/543;G01N21/31 |
| 代理公司： | 北京英赛嘉华知识产权代理有限责任公司 11204 | 代理人： | 王达佐;洪欣 |
| 地址： | 102200 北京市昌平区*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 检测 游离 细胞 刺激 因子 方法 | ||
1.亲和捕获介质在制备用于检测样品中游离B细胞刺激因子的方法的试剂盒中的用途，所述方法包括以下步骤：
a. 使用亲和捕获介质过滤样品；
b. 在预包被捕获抗体的酶标板中加入经步骤a过滤的样品并孵育；
c. 用洗板液冲洗，加入检测抗体并孵育；
d. 用洗板液冲洗，加入底物工作液并孵育；
e. 加入终止液，使用酶标仪读取吸光度；
其中所述亲和捕获介质选自：Protein A琼脂糖凝胶、Protein G琼脂糖凝胶和ProteinL琼脂糖凝胶。
2.如权利要求1所述的用途，其中在步骤a之前，所述方法还包括预处理亲和捕获介质的步骤：
在离心速度为2500rpm且离心时间为5分钟的条件下，使用磷酸缓冲液冲洗亲和捕获介质。
3.如权利要求1所述的用途，其中步骤a的过滤包括，
将样品加入亲和捕获介质中并室温过夜静置孵育，再离心收集过滤的样品。
4.如权利要求1所述的用途，其中步骤b还包括，
在加入经步骤a过滤的样品之后，加入Assay Diluent RD1-111以封板。
5. 如权利要求1所述的用途，其中，
步骤b的孵育为在室温下以500-600 rpm振荡孵育3小时；和/或
步骤c的孵育为在室温下以500-600 rpm振荡孵育1小时；和/或
步骤d的孵育为在室温下以500-600 rpm振荡孵育30分钟。
6. 如权利要求1所述的用途，其中所述亲和捕获介质是Protein A配体偶联于4%琼脂糖凝胶的孔径为1 μm的微孔板。
7.检测样品中游离B细胞刺激因子的方法，所述方法包括以下步骤：
a. 使用亲和捕获介质过滤样品；
b. 在预包被捕获抗体的酶标板中加入经步骤a过滤的样品并孵育；
c. 用洗板液冲洗，加入检测抗体并孵育；
d. 用洗板液冲洗，加入底物工作液并孵育；
e. 加入终止液，使用酶标仪读取吸光度；
其中所述亲和捕获介质选自：Protein A琼脂糖凝胶、Protein G琼脂糖凝胶和ProteinL琼脂糖凝胶。
8.如权利要求7所述的方法，其中在步骤a之前，所述方法还包括预处理亲和捕获介质的步骤：
在离心速度为2500rpm且离心时间为5分钟的条件下，使用磷酸缓冲液冲洗亲和捕获介质。
9.如权利要求7所述的方法，其中步骤a的过滤包括，
将样品加入亲和捕获介质中并室温过夜静置孵育，再离心收集过滤的样品。
10.如权利要求7所述的方法，其中步骤b还包括，
在加入经步骤a过滤的样品之后，加入Assay Diluent RD1-111以封板。
11. 如权利要求7所述的方法，其中，
步骤b的孵育为在室温下以500-600 rpm振荡孵育3小时；和/或
步骤c的孵育为在室温下以500-600 rpm振荡孵育1小时；和/或
步骤d的孵育为在室温下以500-600 rpm振荡孵育30分钟。
12. 如权利要求7所述的方法，其中所述亲和捕获介质是Protein A配体偶联于4%琼脂糖凝胶的孔径为1 μm的微孔板。
13.用于检测样品中游离B细胞刺激因子的试剂盒，所述试剂盒包括权利要求7至12中任一项所述的方法中的试剂。
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