[发明专利]一种细胞表面抗原的检测方法及其应用

说明书

本发明公开了一种细胞表面抗原的检测方法及其应用，涉及检测领域。一种细胞表面抗原的检测方法，包括以下步骤：将脂质体化待测细胞与捕获微球、荧光微球混合反应，检测荧光强度，分析细胞表面抗原表达情况；所述捕获微球表面包被有抗靶标细胞表面特异性抗原的第一抗体；所述荧光微球表面包被有抗靶标细胞表面目标抗原的第二抗体。该检测方法成本低，能够用于直接定量定性分析特定种类细胞的表面抗原表达情况。

技术领域

本发明涉及检测领域，尤其是涉及一种细胞表面抗原的检测方法及其应用。

背景技术

树突状细胞是免疫系统中最重要的细胞之一，其功能贯穿早期的病原识别到后期的获得性免疫激活，在早期就能够反映疫苗的免疫原性强弱。相关技术中，多通过流式细胞分选技术从全血样本或者人外周血单细胞核细胞(PBMC)中分离特定淋巴细胞群体，再分析检测细胞表面抗原。其原理为：经过荧光标记或染色的单细胞悬液被蠕动泵抽进充满鞘液的流动室内，在鞘液的包裹和相对运动下，单细胞包裹液滴均匀排列喷出；当通过充电使这些液滴带有正、负电荷后，在高压电场下液滴会改变方向，落入各自对应的收集容器内，从而实现对细胞的分选。但是该方法存在仪器成本高等问题。并且，其只能将特定种类的细胞分选收集，用于下一步的实验，而无法将细胞表面的标志物进行荧光标记和定量分析，后续仍需要继续处理细胞，进行荧光标记，然后再利用其他免疫学平台进行测试，操作复杂，周期较久。且由于树突状细胞在血液中的含量较少，而目前的流式分选仪器价格昂贵，且无法对接种疫苗人群血液中树突状细胞的早期免疫应答情况进行分析。

因此，需要提供一种成本较低、利于分析特定种类细胞的表面抗原表达情况的方法。

发明内容

本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出一种细胞表面抗原的检测方法，成本低，能够用于直接定量定性分析特定种类细胞的表面抗原表达情况。

本发明还提供一种用于细胞表面抗原检测的试剂盒。

本发明还提供上述检测方法或试剂盒的应用。

根据本发明的第一方面实施例的一种细胞表面抗原的检测方法，包括以下步骤：将脂质体化待测细胞与捕获微球、荧光微球混合反应，检测荧光强度，分析细胞表面抗原表达情况；

所述捕获微球表面包被有抗靶标细胞表面特异性抗原的第一抗体；

所述荧光微球表面包被有抗靶标细胞表面目标抗原的第二抗体。

根据本发明实施例的检测方法，至少具有如下有益效果：

实施例的检测方法结合脂质体技术、流式技术和荧光免疫技术，采用双抗夹心法对靶标细胞实现荧光标记，可以免分离纯化、直接检测样本(如：全血样本)中靶标细胞表面抗原等标志物的表达情况，具有高灵敏度、耗时少(实验周期短)的优点。相比流式细胞分选技术，该检测方法仅需要使用实验室最常见的单激光四通道流式细胞仪中的单个荧光通道即可，可将仪器成本降低数十倍。

用于检测全血样本中的树突状细胞等细胞时，该检测方法利用实验室常规具备的基础配置流式细胞仪即可实现免分离地对树突状细胞表面各类标志物进行高灵敏度、快速的测定，对系统疫苗学研究树突状细胞免疫应答情况、进而揭示整个免疫系统的免疫应答进度有重大意义，还可以在疫苗接种后的短期内快速对疫苗引起的免疫原性进行定量分析。

根据本发明的一些实施例，所述待测细胞可以为全血中的细胞。

根据本发明的一些实施例，所述待测细胞可以包括树突状细胞。所述靶标细胞表面特异性抗原为靶标细胞表面特异性强的标志物，利用所述第一抗体可以特异性富集靶标细胞。例如：所述靶标细胞为树突状细胞，靶标细胞表面特异性抗原可以为CD209。所述第二抗体用于分析靶标细胞表面目标抗原的表达情况。例如：所述靶标细胞为树突状细胞，靶标细胞表面目标抗原可以为CD180或CD169。CD180可用于评估Toll-like受体信号通路情况，CD169可用于评估干扰素诱导免疫应答情况。