[发明专利]一种黄颡鱼头肾成纤维细胞传代培养方法在审
| 申请号： | 202310563005.4 | 申请日： | 2023-05-18 |
| 公开（公告）号： | CN116640722A | 公开（公告）日： | 2023-08-25 |
| 发明（设计）人： | 暨杰;周杰;林舸;宗永钦;张凯;宁先会;王涛;尹绍武 | 申请（专利权）人： | 南京师范大学 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071;C12N5/077 |
| 代理公司： | 南京苏高专利商标事务所(普通合伙) 32204 | 代理人： | 柏尚春 |
| 地址： | 210024 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 鱼头 纤维 细胞 传代 培养 方法 | ||
1.一种黄颡鱼头肾成纤维细胞传代培养方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)黄颡鱼的选取：选取健康的黄颡鱼，取样前饥饿24小时；
(2)黄颡鱼血清的获取：对黄颡鱼进行静脉取血，所得血液静置至析出血清，将血清离心过滤后冻存备用；
(3)头肾组织的分离：对静脉取血后的黄颡鱼进行解剖，将获得的头肾组织进行消化；
(4)配制完全培养液：以RPMI 1640培养基为基础，再分别加入胎牛血清、双抗溶液、黄颡鱼血清；
(5)原代培养：利用细胞培养液终止步骤(3)的组织消化过程，终止消化后离心收集细胞，重悬于完全培养液后置于培养箱培养；
(6)传代培养：待头肾细胞出现成长梭形并达到一定铺瓶率时，可进行传代培养，使用胰酶进行消化，消化后离心收集细胞，置于培养箱传代培养。
2.根据权利要求1所述的一种黄颡鱼头肾成纤维细胞传代培养方法，其特征在于，所述步骤(1)中的黄颡鱼为商品规格鱼，体长16±5cm，体重为180±20g。
3.根据权利要求1所述的一种黄颡鱼头肾成纤维细胞传代培养方法，其特征在于，所述步骤(2)中所得黄颡鱼血液在室温静置2～3小时后自然析出血清。
4.根据权利要求1所述的一种黄颡鱼头肾成纤维细胞传代培养方法，其特征在于，步骤(3)中所述消化过程是将黄颡鱼头肾组织进行物理剪碎，再置于胰酶中进行消化，所述胰酶浓度为0.25％(w/v)。
5.根据权利要求4所述的一种黄颡鱼头肾成纤维细胞传代培养方法，其特征在于，所述步骤(3)消化是在金属浴28℃下消化15-20min。
6.根据权利要求1所述的一种黄颡鱼头肾成纤维细胞传代培养方法，其特征在于，步骤(4)所述完全培养液是以RPMI 1640为基础培养基，再分别加入体积分数为15-20％(v/v)的胎牛血清、1-2％(v/v)青霉素/链霉素双抗溶液和2-5％(v/v)的黄颡鱼血清，培养液的pH在7.0～7.4之间。
7.根据权利要求4所述的一种黄颡鱼头肾成纤维细胞传代培养方法，其特征在于，所述步骤(5)细胞培养液为含10％胎牛血清的RPMI 1640细胞培养液。
8.根据权利要求1所述的一种黄颡鱼头肾成纤维细胞传代培养方法，其特征在于，步骤(6)所述胰酶为EDTA胰酶，其浓度为0.25％(w/v)。
9.根据权利要求1所述的一种黄颡鱼头肾成纤维细胞传代培养方法，其特征在于，步骤(6)中消化时间为3～4min，温度28℃。
10.根据权利要求1所述的一种黄颡鱼头肾成纤维细胞传代培养方法，其特征在于，步骤(6)所述离心转速为1000×g，离心时间为5-10min。
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