[发明专利]一种托里桉组培育苗体系的建立方法

权利要求书

1.一种托里桉组培育苗体系的建立方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)托里桉外植体采集及消毒

在托里桉母株上选取顶芽饱满、无病虫害的嫩芽，剪除叶片，保留每个芽点，剪成4～5cm大小的枝条，用流水冲洗掉表面灰尘；然后利用洗衣粉水和升汞消毒液消毒，并用无菌水浸泡冲洗，得到托里桉外植体；

(2)脱毒培养、诱导培养和生根培养

将步骤(1)中得到的托里桉外植体用刀片切成1～2cm大小的芽段，每个芽段必须保留一个芽点，接入到脱毒培养基中培养10～15天进行脱毒处理，然后将脱毒成功的外植体切掉底部2～3mm后接入到诱导培养基中培养20～30天，待其长出新芽；接着将长出的新芽切下4～5mm接入到增殖培养基中，以20天为周转日期，培养至9～10代；再取长1～1.5cm的芽枝接入生根培养基中培养7～8天，使其长出根须，继续培养到20天，转入炼苗大棚继续培养10～12天，获得无菌苗；其中，培养基配方如下：

脱毒培养基：MS改良培养基、5mg/L的L-半胱氨酸、0.83mg/L的KI、4mg/L的核黄素、0.5mg/L的6-BA、0.35mg/L的NAA、6g/L的卡拉胶、30g/L的白糖；

诱导培养基：MS改良培养基、5mg/L的L-半胱氨酸、0.83mg/L的KI、4mg/L的核黄素、0.45mg/L的6-BA、0.35mg/L的NAA、6g/L的卡拉胶、30g/L的白糖；

增殖培养基：MS改良培养基、6mg/L的L-半胱氨酸、0.83mg/L的KI、4.8mg/L的核黄素、0.4mg/L的6-BA、0.3mg/L的NAA、1mg/L的维生素C、6g/L的卡拉胶、30g/L的白糖；

生根培养基：MS改良培养基、1mg/L的L-半胱氨酸、1mg/L的IBA、0.4mg/L的ABT生根粉、9.6mg/L的VB1、0.05g/L的活性炭粉、7g/L的卡拉胶、20g/L的白糖；

(3)炼苗、移栽和苗期管理

将步骤(2)中得到的无菌苗放置在温室中，进行高温炼苗，当苗木高度达到或超过4㎝时，用净水反复将培养基清洗干净，然后将洗净的苗木移栽到培养袋中，移栽完成后立即浇定根水，覆盖薄膜并加遮阴网保温保湿，于遮阴度70～80％、湿度80～90％和温度15～28℃条件下进行培养；移栽后第5～7天后去掉薄膜，并对幼苗进行第1次消毒，之后每7～10天消毒1次，移栽20～25天喷施第1次复合肥水溶液，此后每7～10天喷施复合肥水溶液一次，苗高15～25cm时出圃造林。

2.根据权利要求1所述的托里桉组培育苗体系的建立方法，其特征在于：

步骤(2)中，脱毒培养基、诱导培养基和增殖培养基中的MS改良培养基配方如下：KNO₃1.8g/L、NH₄NO₃ 0.504g/L、KH₂PO₄ 0.324g/L、Ca(NO₃)₂*4H₂O 0.66g/L、MgSO₄*7H₂00.3625g/L；

步骤(2)中，生根培养基中的MS改良培养基配方如下：KNO₃ 0.288g/L、NH₄NO₃ 0.36g/L、KH₂PO₄ 0.27g/L、Ca(NO₃)₂*4H₂O 0.6g/L、MgSO₄*7H₂0 0.3625g/L。

3.根据权利要求1所述的托里桉组培育苗体系的建立方法，其特征在于，步骤(1)中所述的用洗衣粉水和升汞消毒液消毒通过如下步骤实现：

将枝条用200g/L的洗衣粉水浸泡15min，边浸泡边用毛笔刷洗，然后用流水冲洗干净残留的洗衣粉水；再将处理后的枝条用无菌水浸泡1min，倒掉无菌水后，加入升汞消毒液并滴入三滴吐温-20摇晃浸泡7min，用无菌水浸泡冲洗三遍，分别是2min、5min、8min；

所述的升汞消毒液的配制方法如下：将0.5g升汞和500ml水混合后，再滴加20滴吐温-20。