[发明专利]一种化学发光分析方法及其应用

权利要求书

1.一种化学发光分析方法，其通过检测待测样品中的至少两种不同粒径的受体微球与活性氧反应产生的化学发光信号强度来分析判断待测样品中是否包含待测目标分子和/或待测目标分子的浓度。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述两种不同粒径的受体微球的粒径差值不低于100nm；优选不低于150nm；更优选不低于200nm；和/或

所述两种不同粒径的受体微球的粒径比选自1:(1.1-10)；优选选自1:(2-8)；更优选选自1:(3-6)；和/或

所述受体微球的使用浓度为1ug/mL-1000ug/mL；优选为10ug/mL-500ug/mL，更优选为10ug/mL-250ug/mL。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述方法为均相化学发光分析方法，

所述方法包括以下步骤：

S1，将待测样本与包含至少两种不同粒径的受体微球的试剂a混合后，再与包含供体微球的试剂b混合，从而得到待测样品；

S2，利用能量或活性化学物与步骤S1中得到的待测样品接触，激发供体产生活性氧；

S3，通过检测待测样品中的至少两种不同粒径的受体微球与活性氧反应产生的化学发光信号强度来分析判断待测样品中是否包含待测目标分子和/或待测目标分子的浓度。

4.根据权利要求1-3中任意一项所述的方法，其特征在于，所述化学发光信号的检测波长为520～620nm；和/或

采用600～700nm的红色激发光进行激光照射。

5.根据权利要求1-4中任意一项所述的方法，其特征在于，所述受体微球包括发光组合物和基质，所述发光组合物填充于基质中和/或包被于基质表面；

优选地，所述发光组合物能够与活性氧反应产生可检测的化学发光信号，其包含化学发光化合物和金属螯合物；

优选地，所述化学发光化合物选自烯烃化合物，优选选自二甲基噻吩、双丁二酮化合物、二氧杂环己烯、烯醇醚、烯胺、9-亚烷基苍耳烷、9-亚烷基-N-9,10二氢化吖啶、芳基乙醚烯、芳基咪唑和光泽精以及它们的衍生物，更优选选自二甲基噻吩及其衍生物；

优选地，所述金属螯合物的金属是稀土金属或VIII族金属，优选选自铕、铽、镝、钐、锇和钌，更优选选自铕；

更优选地，所述金属螯合物包含选自下列的螯合剂：MTTA、NHA、BHHT、BHHCT、DPP、TTA、NPPTA、NTA、TOPO、TPPO、BFTA、2,2-二甲基-4-全氟丁酰-3-丁酮(fod)、2,2’-联吡啶(bpy)、联吡啶基羧酸、氮杂冠醚、氮杂穴状配体和三辛基氧化膦以及它们的衍生物；

进一步优选地，所述发光化合物是二甲基噻吩的衍生物，所述金属螯合物是铕螯合物。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述基质材料选自天然的、合成或改性的天然存在的聚合物，其包括但不限于：琼脂糖、纤维素、硝化纤维素、醋酸纤维素、聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚乙烯、聚丙烯、聚(4-甲基丁烯)、聚丙烯酰胺、聚甲基丙烯酸酯、聚对苯二甲酸乙二醇酯、尼龙、聚丁酸乙烯或聚丙烯酸酯；优选地，所述基质为聚苯乙烯乳胶微球；进一步优选为羧基和/或醛基化聚苯乙烯乳胶微球；和/或

所述基质的表面直接连接有生物活性物质，所述生物活性物质能够与待测目标分子特异性结合；和/或

所述基质的表面包被包覆层，所述包覆层的表面连接有生物活性物质，所述生物活性物质能够与待测目标分子特异性结合；

优选地，所述包覆层中的包覆物选自多糖、高分子聚合物或生物大分子，优选为多糖；

优选地，所述基质的表面包被至少两个连续多糖层的涂层，其中连续多糖层中的每一层自发地与前一多糖层中的每一层相关联。