[发明专利]能避免胚胎培养液中母源性污染的卵丘细胞去除液的制备方法

权利要求书

1.一种能避免胚胎培养液中母源性污染的卵丘细胞去除液的制备方法，其特征在于，

通过以下步骤实现：

(1)配制囊胚培养卵丘细胞去除液：采用适量透明质酸钠，乙酰半胱氨酸，谷胱甘肽和聚乙烯吡咯烷酮，溶解于3-吗啉丙磺酸缓冲液(MOPS)中配制而成；

(2)在囊胚培养阶段去除卵丘细胞：

(a)使用步骤1配制好的卵丘细胞去除液在培养皿上制作5个100微升的卵丘细胞去除液微滴，其上加盖胚胎培养油，提前将配置好的卵丘细胞去除液放入37度培养箱平衡30-60分钟，将在常规胚胎培养液中培养的胚胎用155μm口径的操作针转移至卵丘细胞去除液中；

(b)使用上述操作针对置于卵丘细胞去除液中的胚胎反复缓慢吹打5次，之后转移至下一个微滴中重复上述操作，共转移5次；

(c)在400倍倒置显微镜下检查粘附在胚胎表面的卵丘细胞是否脱除干净，如不干净则重复上述步骤2；

(d)制作囊胚培养液微滴，吸取10μl囊胚培养液制作培养微滴，其上加盖胚胎培养油，放置于胚胎培养专用的三气培养箱中平衡6小时以上；

(e)将已经脱除干净的胚胎在培养微滴中漂洗一次后可转移至囊胚培养液中继续培养，至此，完成卵丘细胞颗粒脱除。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，囊胚培养卵丘细胞去除液的配方为：

基础培养液：20mM 3-吗啉丙磺酸缓冲液(MOPS),

终浓度150-200mg/L透明质酸钠,

终浓度1-5mM乙酰半胱氨酸,

终浓度0.1-0.5mM谷胱甘肽,

终浓度1g/L聚乙烯吡咯烷酮,

体积分数10％人血清替代物；

测量并调节配制好的卵丘细胞去除液pH值为7.3-7.5之间，渗透压270-300mOsm/kg。

3.权利要求1所述方法在解决囊胚培养阶段培养液中母源性卵丘细胞污染干扰培养液中应用，其特征在于，在卵丘细胞去除液进行胚胎表面残余卵丘细胞脱除。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述方法在人类胚胎体外发育至第四天时应用。