[发明专利]一种低内毒素质粒提取试剂盒及其提取方法

权利要求书

1.一种低内毒素质粒提取试剂盒，其特征在于：包括洗涤液A、裂解液、中和沉淀液、孵育液、DNA结合液、洗杂液、洗涤液B和质粒溶解液。

2.根据权利要求1所述的一种低内毒素质粒提取试剂盒，其特征在于：所述DNA结合液由20 % PEG6000、2.5 M NaCl、1 % MOPS组成并使用纯水或超纯水定容。

3.根据权利要求1所述的一种低内毒素质粒提取试剂盒，其特征在于：所述洗涤液A由1% MOPS、1 % RNase A溶解于1 × PBS中形成。

4.根据权利要求1所述的一种低内毒素质粒提取试剂盒，其特征在于：所述裂解液由1% SDS十二烷基硫酸钠溶解于水中并使用6 M NaOH调pH≥14制得。

5.根据权利要求1所述的一种低内毒素质粒提取试剂盒，其特征在于：中和沉淀液由30% 乙酸钾300.0 g，25 % 冰乙酸并用纯水定容。

6.根据权利要求1所述的一种低内毒素质粒提取试剂盒，其特征在于：孵育液由1 %Triton X-114，1 % MOPS，2.5M NaCl，15 % 异丙醇组成，并用纯水定容。

7.根据权利要求1所述的一种低内毒素质粒提取试剂盒，其特征在于：洗涤液B由体积分数80 %的无水乙醇和二次去离子水组成，使用0.22 μm无菌滤膜过滤后使用。

8.根据权利要求1所述的一种低内毒素质粒提取试剂盒，其特征在于：质粒溶解液的配制方法为：吸取1 M Tris-HCl 1 mL和0.5 mM EDTA 0.2 mL至100 mL容量瓶中，使用无菌水定容至100 mL。

9.如权利要求1-8中任一项所述的低内毒素质粒提取试剂盒提取质粒的方法，其特征在于：包括以下步骤：

（1）菌体培养及收集：收集处于对数生长中后期，活细胞较多的菌体沉淀；

（2）质粒粗品制备：收集的菌体沉淀经重悬，裂解，沉淀杂质后过滤得到含有质粒的上清；

（3）质粒DNA纯化：使用含有硅醇基的硅胶或羧基硅胶磁珠吸附质粒，通过微孔筛网过滤的方法去除内毒素、盐离子和其他杂质，最终使质粒溶于无内毒素的质粒溶解液中。

10.根据权利要求6所述的低内毒素质粒提取试剂盒提取质粒的方法，其特征在于：当使用含有硅醇基的硅胶作为纯化介质时，使用的过滤材料为10 μm无菌筛网，该筛网有两种规格，即可以搭配15 mL离心管和50 mL离心管使用。