[发明专利]一种对人iPSCs进行基因编辑制备神经干细胞的方法

权利要求书

1.一种用于敲除iPSCs的BCOR-MAP和PLSCR1基因的sgRNA，其特征在于，所述sgRNA的序列如SEQ ID NO:1-SEQ ID NO:4所示。

2.一种用于敲除iPSCs的BCOR-MAP和PLSCR1基因的质粒，其特征在于，所述质粒是将如权利要求1所述的sgRNA连接到基础质粒上而得到的；优选地，所述基础质粒为PX330质粒。

3.如权利要求1所述的sgRNA或如权利要求2或3所述的质粒在制备神经干细胞中的应用。

4.一种对人iPSCs进行基因编辑制备神经干细胞的方法，其特征在于，所述方法是将人iPSCs的BCOR-MAP和PLSCR1基因敲除而得到所述NSCs。

5.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述人iPSCs的BCOR-MAP、PLSCR1基因敲除是采用如权利要求1所述的sgRNA或如权利要求2或3所述的质粒进行的。

6.一种对人iPSCs进行基因编辑制备神经干细胞的方法，其特征在于，包含以下步骤：

(1)将如权利要求1所述的sgRNA连接到基础质粒上；

(2)将构建好的质粒转入人iPSCs中，用hiPSCs培养基进行培养；

(3)用Puromycin对所述步骤(3)获得的细胞进行筛选；

(4)挑取单克隆并鉴定BCOR-MAP和PLSCR1基因是否被敲除，筛选BCOR-MAP和PLSCR1基因被敲除的细胞，得到NSCs。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述步骤(4)还包括检测BCOR-MAP和PLSCR1基因被敲除的细胞是否表达NSC标志物，挑选表达NSC标志物的细胞，从而得到NSCs。

8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中基础质粒为PX330质粒；所述步骤(2)中转入方式为电转；所述步骤(2)中人iPSCs为培养状态良好的人iPSCs；所述步骤(2)中hiPSCs培养基是mTesR1培养基。

9.一种神经干细胞，其特征在于，所述神经干细胞是由如权利要求4-8任一所述的方法制备而成的。

10.一种如权利要求9所述的神经干细胞的培养或者维持神经干性方法，其特征在于，所述方法包括采用hiPSCs培养基培养所述神经干细胞。