[发明专利]一种高纯度不饱和脂肪酸的制备方法

说明书

本发明涉及一种高纯度不饱和脂肪酸的制备方法。该方法利用‑50℃～15℃低温条件的高效制备色谱方法完成分离纯化，洗脱剂、色谱柱以及管路的温度都需要进行温度控制，控制精度为±2℃，采用C18键合固定相，以二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳六烯酸(DHA)或棕榈油酸(PLA)中的一种为原料，用甲醇水进行洗脱，可以获得纯度大于99％且关键杂质可控的高纯度产品。本发明的制备方法操作简便，载样量高，回收率高，满足高纯度不饱和脂肪酸的制备及对杂质控制的需求。

技术领域

本发明属于高纯度不饱和脂肪酸的分离纯化与精制技术领域，是一种高纯度不饱和脂肪酸的制备方法。

技术背景

不饱和脂肪酸主要包括α-亚麻酸(ALA)、二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳六烯酸(DHA)、亚油酸(LA)、γ-亚麻酸(GLA)等，是人体不可缺少的营养物质，在抗血脂、抗癌、抗炎等方面发挥着重要的作用，但人体自身合成的能力有限，主要通过药食来源进行补充，因而不饱和脂肪酸在医疗保健领域有着广阔的应用市场。

不饱和脂肪酸的主要来源是植物油和鱼油，原料中的主成分含量通常较低，需通过分离纯化工艺除去原料中的色素、杂质等，才能作为保健食品、医药等领域原料使用。

高效液相制备色谱是一种以收集色谱流出物质来获取纯化产品的色谱分离过程，具有操作简便、填料选择多样、重复性好，载样量大，可工业化等独特优势，在脂肪酸的纯化制备中也有较多应用。专利文献CN109438220B公布了一种从鱼油中纯化EPA的高效液相色谱方法，可以获得液相纯度97％左右的样品。专利文献CN105848748A、CN109401850A、CN107586259B均描述了一种利用模拟移动床或在模拟移动床的基础上改进的纯化不饱和脂肪酸的液相色谱法，对于混合脂肪酸的纯化非常有益。以上方法对于高纯度脂肪酸的制备提供了很好的参考和选择，但存在纯度不够，方法开发较为复杂，对设备的设计要求比较高等不足。更重要的是，随着研究的深入和法规要求的提高，不饱和脂肪酸产品对关键杂质的限量要求越来越严格，当前的色谱方法存在目标成分和关键杂质分离度不够、杂质限量不可控等问题，主峰和杂质的分离度不够还会导致制备色谱的载样量和回收率非常低，不利于放大生产和工业化。

温度是色谱分析的重要参数之一，对样品的溶解度、流动相的粘度、填料的表面性能等有影响，从而会引起保留规律及选择性的改变，低温条件主要通过增强保留及增加分离度从而获得特殊的选择性。低温条件在分析色谱中有着很多应用，比如对于热不稳定以及稳定性差的物质的分离分析中有非常好的效果，在手性化合物的分离中也能通过低温的条件增强选择性，以及利用液态二氧化碳作为流动相研究极低温色谱下小分子有机物的保留行为(doi:10.1002/jssc.201500151.)等。然而，高效制备液相色谱一般是在常温下进行实验，对于温度的控制存在不足。不饱和脂肪酸中存在很多异构体杂质及结构类似的杂质，对分离度有较高的要求，在我们的研究中发现，低温可以明显增加主峰和杂质之间的分离度，且有很好的峰形，可以制备出高纯度样品且满足杂质限量需求。

发明内容

本发明主要针对现有高效液相制备色谱在高纯度不饱和脂肪酸制备方法中的不足，提供一种能有效提高主峰和杂质之间分离度、控制关键杂质含量的制备方法。

本发明包括以下内容：

一种高纯度不饱和脂肪酸的制备方法，在低温条件下采用高效制备色谱方法对原料完成分离纯化。

作为本发明的优选方案，所述高效制备色谱方法包括以下步骤：

S1：取不饱和脂肪酸粗品为原料，配制成上样原液；

S2：将步骤S1中的上样原液上样至色谱柱中；

S3：用洗脱剂对色谱柱进行洗脱，获得洗脱液；

S4：对洗脱液依序进行收集目标馏分、浓缩处理，即得纯品。

作为本发明的优选方案，所述低温条件的温度范围为-50℃～15℃；